Včelí jed: Od jedu k lieku

1. Entomologická divízia, Katedra zoológie, Prírodovedecká fakulta, Univerzita Beni-Suef, Beni-Suef 62521, Egypt
   2. Department of Clinical Laboratory Sciences, College of Applied Medical Sciences, Taif University, P.O. Box 11099, Taif 21944, Saudská Arábia
   3. Ústav patológie, Lekárska fakulta, Univerzita Mansoura, Mansoura 35516, Egypt
   4. Katedra fyziológie, College of Medicine, Taif University, P.O. Box 11099, Taif 21944, Saudská Arábia
   5. Ústav fyziológie, Lekárska fakulta, Univerzita Beni-Suef, Beni-Suef 62521, Egypt
   6. Fyziologická divízia, Katedra zoológie, Prírodovedecká fakulta, Univerzita Beni-Suef, Beni-Suef 62521, Egypt
   *
   Autor, ktorému treba adresovať korešpondenciu.
   Akademickí redaktori: Nada Orsolic a Maja Jazvinšćak Jembrek
   Molecules 2021, 26(16), 4941; https://doi.org/10.3390/molecules26164941
   Prijaté: 17. júna 2021 / Upravené: 10. augusta 2021 / Prijaté: 11. augusta 2021 / Zverejnené: 15. augusta 2021
   (Tento článok patrí do špeciálneho vydania včelích produktov: Nedávny pokrok v štúdiách zdravotných výhod)

Abstraktné
Hmyz z radu Hymenoptera má obrannú látku, ktorá obsahuje mnoho biologicky aktívnych zlúčenín. Konkrétne, jed včiel medonosných (Apis mellifera) obsahuje množstvo enzýmov a peptidov, ktoré sú účinné proti rôznym chorobám. Rôzne výskumné práce uviedli možnosť použitia včelieho jedu (priame včelie bodnutie alebo v injekčnej forme) pri liečbe niekoľkých komplikácií; buď in vivo alebo in vitro. Iné správy používali aktívne frakcie včelieho jedu klinicky alebo v laboratórnom meradle. Mnoho správ a publikácií uvádza, že včelí jed a jeho zložky majú viacero biologických účinkov vrátane antimikrobiálnych, antiprotozoálnych, protirakovinových, protizápalových a antiartritických vlastností. Cieľom tohto prehľadu je poukázať na použitie samotného včelieho jedu alebo jeho frakcií pri liečbe niekoľkých chorôb a proti toxicite liekov ako alternatívneho protokolu terapie. Aktualizované molekulárne mechanizmy pôsobenia včelieho jedu a jeho zložiek sú diskutované vo svetle predchádzajúcich aktualizovaných publikácií. Prehľad tiež sumarizuje potenciál jedu naloženého na nanočastice ako nosiča liečiva a jeho molekulárne mechanizmy. Nakoniec sú predvedené aj produkty včelieho jedu dostupné na trhoch.
Kľúčové slová: včelí jed; zápalové a chronické ochorenia; nanočastice; produkty včelieho jedu

1. Úvod
   Apiterapia je alternatívna terapia, ktorá sa opiera o použitie produktov včiel, predovšetkým včelieho jedu, na liečbu mnohých ľudských chorôb [1,2,3,4]. Liečivé účinky medu a iných včelích produktov sú uvedené v rôznych náboženských knihách ako Veda, Biblia a Svätý Korán [5,6]. Všemohúci Boh potvrdil pravdu, keď vo svätom Koráne povedal nasledovné:
   „A tvoj Pán vdýchol včele,“ vezmi si pre seba medzi hory, domy a medzi stromy a [v] tom, čo stavajú (68). Potom jedzte zo všetkých plodov a nasledujte cesty svojho Pána, ktoré vám určil. z ich útrob vyteká nápoj rôznej farby, v ktorom je pre ľudí liečivý účinok. V skutočnosti je to znamenie pre ľudí, ktorí rozmýšľajú (69). Surat Al-Nahl.
   Po tisíce rokov ľudia používali včelie produkty vrátane medu, propolisu a jedu z európskej včely medonosnej Apis mellifera ako lieky; použitie týchto produktov včiel na liečbu chorôb je známe ako apiterapia. Liečebné využitie včelieho jedu sa datuje do starovekého Egypta a Grécka a v Číne sa praktizuje už 3000–5000 rokov [7]. Staroveký grécky lekár Hippokrates používal včelí jed na terapeutické účely [8]. V modernejšej dobe záujem o účinky včelieho jedu obnovili v roku 1868 Rusi Lokumski a Lubarski, ktorí publikovali prácu s názvom „Včelí jed, liek“ [9]. V poslednej dobe lekári a licencovaní apiterapeuti používajú včelí jed na liečbu pacientov, ktorí trpia chronickými alebo autoimunitnými ochoreniami. Klinické štúdie aj laboratórne testy potvrdili, že včelí jed je vynikajúcou formou bioterapie. Včelí jed buď bojuje proti zápalu a deštrukcii spojivových tkanív (ako v prípade reumatizmu a artritídy), alebo vracia aktivitu a pohyblivosť podporou prirodzenej obranyschopnosti organizmu (ako v prípade roztrúsenej sklerózy a lupusu) [1,10,11 ]. V poslednej dobe bol jed hodnotený aj na liečbu rôznych typov rakoviny [12,13,14]. Okrem terapeutických účinkov sa v literatúre uvádza, že včelí jed môže znižovať nežiaduce účinky iných typov liekov a konvenčných liekov [15,16,17].
   Cieľom tohto prehľadu je poskytnúť komplexný aktualizovaný prehľad zloženia včelieho jedu, výhod a aplikácií v experimentálnych a klinických liekoch. Prehľad tiež vysvetlí, ako môže tento jed pomôcť pri liečbe mnohých ľudských chorôb a pôsobiť proti nepriaznivým vedľajším účinkom rôznych liekov. Okrem toho sa v prehľade diskutuje aj o dôležitosti použitia polymérov a ich nanoforiem ako nosičov včelieho jedu.

2. Hymenoptera Hmyz
   Včely, mravce a osy patriace do entomologického poriadku: Hymenoptera môže spôsobiť toxicitu pre ľudí prostredníctvom envenomácie. Niektoré blanokrídlovce sú samotárske, ale iné sú prospešné, ako napríklad opeľujúce včely a parazitoidy. Druhy blanokrídlovcov, ktoré môžu postihnúť ľudí, sú bodavý hmyz, ktorý môže použiť svoj bodavý nástroj ako pomstu alebo agresívnu ruku. Tie, ktoré koexistujú v kolonizácii, spôsobujú nebezpečné uštipnutia. Ich toxíny často spôsobujú bolesť predátorom. Jedným zo zaujímavých vzorov blanokrídlovcov je bodavý. Reakciu bodnutia vyvolávajú rôzne faktory, ako sú vizuálne signály a vibrácie. Okrem toho, vibrácie hniezd alebo obťažovanie robotníkov sú faktory, ktoré vyvolávajú štípanie alebo otravu [18].
   Jedy blanokrídlovcov sú vysoko komplexné kombinácie solí, organických prvkov (t.j. aminokyselín, alkaloidov) a neurotransmiterov [19,20]. Zloženie jedov sa veľmi líši medzi blanokrídlymi druhmi a koncentráciou niektorých zložiek a líši sa aj u druhov rovnakého rodu [21,22]. Včelí jed obsahuje niektoré z rovnakých zlúčenín ako osie jedy, ako je adrenalín, noradrenalín, dopamín, serotonín, histamín, hyaluronidáza, fosfolipázy B (PLB) a fosfolipázy A2 (PLA2), zatiaľ čo apamín, melittín a masti obsahujú iba včelie jedy. bunkový degranulačný peptid (MCD) [23].
3. Včelí jed
   Včelí jed (api-toxín) vylučuje žľaza umiestnená v brušnej dutine včiel (Apis mellifera L.). Je to priehľadná kyslá kvapalina bez zápachu, ktorú včely často používajú ako obranný nástroj proti predátorom. Včelí jed (komerčne známy ako Apitox alebo Apitoxín) je kombináciou rôznych zlúčenín. Ako uvádzajú mnohé publikácie, včelí jed obsahuje niekoľko aktívnych molekúl, ako sú peptidy a enzýmy vrátane melitínu (hlavná zložka včelieho jedu), apamínu, adolapínu, peptidu degranulujúceho žírne bunky a enzýmov (fosfolipáza A2 a hyaluronidáza), ako aj iné -peptidové zložky, ako je histamín, dopamín a norepinefrín [3,24,25]. Hlavnými zložkami sú melitín, ktorý tvorí asi 50 percent suchého jedu, a fosfolipáza A2 (PLA2), ktorá tvorí asi 12 percent [26].
   V klasickej medicíne sa včelí jed a toxíny získané z včiel používali na liečbu chronických zápalových porúch, pretože majú rôzne účinky, ako sú antiartritické, protirakovinové a bolesti tlmiace účinky [24,26,27]. Pri terapii včelím bodnutím včely idú priamo do cieľového bodu cez žihadlo, zatiaľ čo pri terapii včelím jedom sa lyofilizovaný jed (zozbieraný od včiel a následne lyofilizovaný) vstrekuje priamo v rôznych dávkach in situ [28,29]. Vpichovanie včelieho jedu má schopnosť liečiť rôzne ochorenia, ako sú autoimunitné poruchy (reumatoidná artritída, psoriáza atď.), neurologické poruchy, chronické zápaly, bolesť, kožné ochorenia a mikrobiálne infekcie [2,8,29].
   3.1. Fyzikálne vlastnosti, chémia a farmakológia včelieho jedu
   Včelí jed je číra tekutina s horkou chuťou, voňavá, má špecifickú hmotnosť 1,13 a pH 4,5–5,5 [30,31]. Keď sa včelí jed dostane do kontaktu so vzduchom, rýchlo vyschne a skryštalizuje [32]. Sušený jed získa svetložltú farbu a niektoré komerčné prípravky sú hnedé, o čom sa predpokladá, že je to kvôli oxidácii niektorých proteínov jedu. Je rozpustný vo vode a nerozpustný v alkohole a sírane amónnom. Včelí jed obsahuje množstvo veľmi prchavých zlúčenín, ktoré sa pri zbere ľahko strácajú [28].
   Uvádza sa, že včelí jed obsahuje zmes mnohých zložiek. Kategória takýchto zložiek zahŕňa proteíny pôsobiace ako enzýmy, ako je fosfolipáza A2, fosfolipáza B, kyslá fosfomonoesteráza, hyaluronidáza, fosfatáza a lyzofosfolipáza, ako aj menšie proteíny a peptidy, ako je melitín, apamín, adolapín, tertiapín a sekapín. Ďalšie zložky zahŕňajú fosfolipidy a fyziologicky aktívne amíny, ako je histamín, dopamín a noradrenalín. Ďalšími zložkami sú aminokyseliny, cukry ako glukóza a fruktóza, feromóny a minerály ako vápnik a horčík. Hlavnou zložkou včelieho jedu je melitín, ktorý sa skladá z 26 aminokyselín a predstavuje 40–50 % suchého jedu [8,12,33].
   Farmakológia včelieho jedu bola študovaná prostredníctvom štúdií in vivo a in vitro [1,4,12,17,34,35,36,37]. Včelí jed má viacero rôznych farmakologických účinkov, ako sú antimutagénne [37], antinociceptívne [37], rádioprotektívne [37], antihepatotoxické [17], cytoprotektívne [17], antioxidačné [4,17], antimikrobiálne [4], antivírusové [4], protizápalové [4,17], neuroprotektívne [4], antiartritické [1], antimetastatické [12] a protinádorové [12] účinky (Postava 1).

3.2. In vitro a predklinické štúdie
Včelí jed bol skúmaný niekoľkými in vitro a predklinickými štúdiami, ktoré preukázali celý rad jeho rozmanitých biologických aktivít.
Ukázalo sa, že včelí jed má antioxidačnú účinnosť in vitro aj in vivo. Čo sa týka štúdií in vitro, antioxidačná aktivita včelieho jedu bola hodnotená rôznymi metódami, vrátane schopnosti zachytávať 2,2-difenyl-1-pikrylhydrazyl (DPPH), redukovať železo/antioxidačnú silu (FRAP), 2,20-azinobis 3- etylbenzotiazolín-6-sulfónová kyselina (ABTS) schopnosť zachytávať voľné radikály, inhibícia látok reaktívnych na kyselinu tiobarbiturovú (TBARS) a inhibícia β-karoténového bielenia [4,38,39]. Výsledky týchto štúdií odhalili antioxidačný potenciál včelieho jedu, hoci nebol spojený s určitou individuálnou zlúčeninou. Somwongin a kol. [39] porovnali antioxidačné účinky rôznych druhov Apis a zistili, že všetky extrakty z jedu vykazovali inhibíciu DPPH, pričom najvyššiu aktivitu vykazoval Apis dorsata nasledovaný Apis mellifera.

Čo sa týka štúdií in vivo, El-Hanoun a kol. [40] injekčne podávali králikom 0,1, 0,2 a 0,3 mg na králika subkutánnou aplikáciou dvakrát týždenne počas 20 týždňov. Výsledky ukázali zvýšenie aktivity glutatión-S-transferázy (GST) a obsahu glutatiónu (GSH) a zníženie hladín malondialdehydu (MDA) a TBARS u liečených králikov, čo potvrdilo antioxidačný účinok včelieho jedu. Okrem toho Mohamed a kol. [41] zistili, že u potkanov s indukovaným žalúdočným vredom liečeným včelím jedom a kyselinou acetylsalicylovou došlo k oslabeniu peroxidácie lipidov. Ahmed a kol. [1] uviedli, že zhoršenie antioxidačného obranného systému u artritických potkanov vyvolaných kompletným Freundovým adjuvans (CFA) sa výrazne zlepšilo v dôsledku podávania včelieho jedu. Zlepšenie antioxidačného obranného systému sa prejavilo znížením peroxidácie pečeňových lipidov a zvýšením obsahu glutatiónu a aktivity antioxidačných enzýmov vrátane glutatiónperoxidázy a GST.
Včelí jed má okrem antioxidačnej aktivity aj protizápalové vlastnosti. Protizápalový účinok včelieho jedu bol zaznamenaný pri artritíde vyvolanej CFA u potkanov [1] a na zvieracom modeli atopickej dermatitídy vyvolanej anhydridom kyseliny ftalovej [42]. Protizápalové účinky sa prejavili znížením zvýšených hladín interleukínu-2 (IL-2) a interleukínu-12 (IL-12) v sére a zvýšením hladiny interleukínu-10 (IL-10) pri artritike vyvolanej CFA. potkanov v dôsledku liečby včelím jedom [1]. Protizápalovú aktivitu včelieho jedu možno pripísať jeho hlavnej zložke, melitínu. Uvádza sa, že táto zlúčenina má protizápalové účinky proti acne vulgaris, neurozápalom, amyotrofickej laterálnej skleróze, artritíde a zápalu pečene [43]. Liečba melitínom moduluje aktiváciu dráh Toll-like receptorov (TLR) a inhibuje expresiu zápalových cytokínov. Zistilo sa, že melitín potláča aktiváciu jadrového faktora kappa B (NF-κB) p65 a inhibuje signál proteínkinázy aktivovanej mitogénom proteín 38 (p38 MAPK) in vitro [44]. Preto môže byť protizápalová aktivita sprostredkovaná signálnymi dráhami NF-KB a p38. In vivo melitín tiež vykazoval protizápalové vlastnosti moduláciou transkripčných faktorov NF-κB a aktivačného proteínu 1 (AP-1) (obrázok 2) [44]. Uvádza sa, že melitín potláča signálne dráhy Toll-like receptora typu 2 (TLR2), Toll-like receptora typu 4 (TLR4), klastrovej diferenciácie 14 (CD14), NF-KB esenciálneho modulátora (NEMO) a rastu odvodeného od krvných doštičiek faktor receptora beta (PDGFRp). Ovplyvnením týchto signálnych dráh melitín znižuje aktiváciu NF-κB proteínu 38 (p38), extracelulárneho signálom regulovanej kinázy 1/2 (ERK1/2), proteínovej kinázy B (PKB), Akt alebo fosfolipázy Cγ1 (PLCγ1). ako aj translokáciu NF-KB do jadra (obrázok 2). Táto deaktivácia vedie k zníženiu zápalu kože, aroty, kĺbov, pečene a neurónového tkaniva (obrázok 2) [45]. V ďalšej signálnej dráhe včelí jed (alebo melitín) inhibuje uvoľňovanie inhibítora NF-KB (IkB) prostredníctvom inhibície IkB kináz (IKK). Takáto inhibícia by mohla byť spôsobená interakciou medzi SH skupinou IκB kinázy α (IKKα) a IκB kinázy β (IKKβ) s včelím jedom alebo molekulou melitínu, čo vedie k deaktivácii NF-κB, a tým znižuje tvorbu zápalových mediátorov. Včelí jed, ako aj melitín môžu tiež priamo interagovať s p50 NF-κB, a tým potlačiť translokáciu p50 do jadra (obrázok 2) [46]. Rôzne extracelulárne signály vrátane TNF-a (kanonická dráha) môžu aktivovať enzým IkB kinázu (IKK), čo vedie k aktivácii NF-KB a uvoľneniu heterodimérov p65/p50. Translokácia heterodimérov NF-κB p65/p50 do jadra im umožňuje viazať sa na ich špecifické sekvencie DNA a podporuje cieľové gény NF-κB zapojené do zápalových reakcií [47]. Včelí jed a melitín môžu produkovať svoje protizápalové účinky ovplyvnením kanonickej dráhy NF-κB prostredníctvom inhibície TNF-α receptorov 1 a 2 (TNFR1 a TNFR2) (obrázok 2) [48].

Obrázok 2. Schematický obrázok znázorňujúci navrhované protizápalové mechanizmy účinku včelieho jedu a melitínu. NF-KB, jadrový faktor-KB; IKB, inhibítor NF-KB; IkB/NF-KB, IKB-NF-KB komplex; IKKa, IKB kináza a; IKKp, IKB kináza p; NEMO, esenciálny modulátor NF-κB; TLR, Toll-like receptor; CD, zhluk diferenciácie; PDGFRp, receptor beta rastového faktora odvodeného od krvných doštičiek; AP-1, aktivačný proteín 1.

Včelí jed a jeho hlavná zložka melitín majú inhibičné účinky na rast rakovinových buniek pri rakovine prostaty. Down-regulácia antiapoptotických génových produktov, ako je B-bunkový lymfóm 2 (Bcl-2) (obrázok 3), X-viazaný inhibítor apoptózy (XIAP), indukovateľná syntáza oxidu dusnatého (iNOS) a cyklooxygenáza-2 ( COX-2) sa môže podieľať na sprostredkovaní protirakovinových účinkov [49,50]. Je pozoruhodné, že surový včelí jed a melitín odhalili protinádorové aktivity proti rôznym rakovinovým bunkovým líniám vrátane bunkových línií rakoviny prsníka, pečene, leukémie, pľúc, melanómu a prostaty [51,52,53,54]. Protirakovinové účinky včelieho jedu a jeho hlavnej zložky melittín možno vysvetliť niekoľkými spôsobmi. Po prvé, protinádorový účinok môže byť sprostredkovaný indukciou vonkajších a vnútorných dráh apoptózy (obrázok 3). Bolo hlásené, že včelí jed a melitín zvýšili expresiu a hladiny rôznych proapoptotických a apoptotických mediátorov, ako sú cytochróm C (Cyt C), proteín 53 (p53), proteín X asociovaný s Bcl-2 (Bax), homológy Bcl-2 antagonista/killer (Bak), kaspáza-3, kaspáza-9 a rôzne typy receptorov smrti a redukovali antiapoptotický mediátor Bcl-2 [12,50,55]. Protinádorové účinky včelieho jedu a melitínu môžu byť tiež sprostredkované inhibíciou signálnych dráh NF-KB a komplexu vápnik-kalmodulín (Ca2+/CaM). Táto inhibícia následne vedie k zníženiu rastu a prežitia nádoru prostredníctvom potlačenia bunkovej proliferácie, angiogenézy, antiapoptózy, invázie a metastáz (obrázok 3) [12]. Uvádza sa, že včelí jed zvyšuje produkciu ROS z mitochondrií, ktoré vyvolávajú vnútornú apoptózu. Okrem toho včelí jed a melitín zvýšili produkciu faktora indukovaného apoptózou (AIF) a endonukleázy G (EndoG), čo sú mitochondriálne proteíny, ktoré aktivujú apoptózu nezávislú od kaspázy [56,57].

Uvádza sa, že včelí jed má antimikrobiálnu aktivitu, ktorá sa pripisuje dvom jeho hlavným zložkám, melitínu a PLA2. Takéto zlúčeniny môžu uplatniť svoje antimikrobiálne účinky proti baktériám produkovaním pórov cez ich membrány, čo vedie k ich poškodeniu a následne k lýze [3,4,58]. Podľa Pucca et al. [59], tieto toxíny včelieho jedu môžu odvodiť synergicky zvýšenú toxicitu prostredníctvom tvorby toxínových komplexov heterooligomerizáciou. Zvýšená bakteriálna lýza môže byť sprostredkovaná tvorbou heterooligomérov melittín-PLA2 na fosfolipidových dvojvrstvových membránach. Keď sa melitín kombinuje s PLA2, melitín sa s väčšou pravdepodobnosťou ľahko viaže na neutrálnu vonkajšiu membránu na povrchu molekuly viažucej lipidy, čo vedie k synergicky zvýšenej lýze. Táto väzba je pravdepodobne sprostredkovaná elektrostatickou príťažlivosťou medzi zásaditými aminokyselinovými zvyškami melitínu a fosfátovou skupinou fosfatidylcholínu (hlavná zložka bunkových membrán). Väzba melittín-fosfolipid umožňuje oligomerizáciu melittínu, tvorbu membránových pórov a lýzu [23,60]. Antivírusový účinok včelieho jedu bol zaznamenaný so zaujímavými zisteniami in vivo aj in vitro. Pri výskumoch in vitro majú včelí jed a melittín významné antivírusové účinky proti neobaleným vírusom (vírus coxsackie a enterovírus-71) ​​a niekoľkým obaleným vírusom (vírus vezikulárnej stomatitídy, vírus chrípky A, vírus herpes simplex atď.) [61]. In vivo melitín chránil myši, ktoré boli vystavené smrteľným dávkam vírusu chrípky A H1N1. Hoci presný mechanizmus účinku, ktorým včelí jed a melitín pôsobia ako antivírusové látky, zostáva nejasný, potvrdilo sa, že včelí jed interaguje priamo s vírusovým povrchom. Okrem toho včelí jed a jeho zložky môžu stimulovať interferón typu I (IFN), a teda potlačiť replikáciu vírusu v hostiteľskej bunke [62].
Okrem predchádzajúcej literatúry Sig et al. [63], Bogdanov [8], Zhang a kol. [2] a Oršolić [12] uviedli, že včelí jed má silné in vivo účinky proti artritíde, Parkinsonovej a Alzheimerovej chorobe a rakovine.

3.3. Klinické aplikácie
Vzhľadom na široké spektrum biologických vlastností včelieho jedu by nebolo prekvapujúce, že jeho použitie by mohlo dosiahnuť terapeutické účely pri ľudských ochoreniach. Terapia včelím jedom, podobne ako mnohé iné prístupy komplementárnej a alternatívnej medicíny, sa používa na liečbu mnohých chorôb [4,28].
Pred aplikáciou injekcií injekčnými striekačkami bol včelí jed vždy dodávaný priamo od včiel medonosnými žihadlami [64,65]. V súčasnosti sa v niektorých podmienkach jed včiel stále dopĺňa takouto tradičnou metódou. Živú včelu hladko pridrží pinzetou alebo inými nástrojmi osoba podávajúca včelí jed, ktorá potom priloží včelu na tú časť tela pacienta, ktorá sa má liečiť, a vtedy včela reflexne bodne. Tu stojí za zmienku, že keď včely bodnú iný hmyz, nezomrú. Napriek tomu včela väčšinou uhynie pri bodnutí do ľudského tela. Po bodnutí do ľudského tela včela nedokáže žihadlo vytiahnuť späť. Zanecháva za sebou nielen žihadlo, ale aj časť tráviaceho traktu, plus svaly a nervy. Toto masívne pretrhnutie brucha zabije včelu [66].
V závislosti od stavu sa schéma liečby môže líšiť. V tomto ohľade môže byť včelí jed podávaný rôznymi terapeutickými metódami, ktoré zahŕňajú priame bodnutie včelou, injekciu včelieho jedu alebo akupunktúru včelieho jedu (tiež nazývanú apiterapia). Hoci sa odporúča podávanie včelieho jedu injekčnou striekačkou a nie priamo od včiel, väčšina štúdií a praktík využíva akupunktúru včelieho jedu vzhľadom na bioaktivitu spojenú s mechanickou stimuláciou akupunktúry [2,4,65].
V klinickom prostredí sa uvádza, že injekcia včelieho jedu v akutných bodoch je účinná pri liečbe klinických porúch, ako je Parkinsonova choroba, neuropatická bolesť, Alzheimerova choroba, ochorenie medzistavcových platničiek, poranenie miechy, muskuloskeletálna bolesť, artritída, roztrúsená skleróza, koža choroba a rakovina [67]. Účinnosť injekcie včelieho jedu v akupunktúrnych bodoch možno vyplýva z jeho protizápalových, antinociceptívnych a antiapoptóznych účinkov.
Pokiaľ ide o terapeutický potenciál včiel, štúdia vykonaná na ľuďoch preukázala, že akupunktúra včelím jedom preukázala účinnosť ako adjuvans pri liečbe Parkinsonovej choroby, keď boli dospelí stimulovaní na 10 akupunktúrnych bodoch dvakrát týždenne počas 8 týždňov [68].
Podľa klinickej štúdie Hausera et al. [10] sa zistilo, že terapeutické injekcie včelieho jedu pacientom so sklerózou multiplex sú účinné pri znižovaní funkčnej slabosti pacienta spôsobenej chorobou. Počas 12-mesačného skúšania s použitím liečby včelím jedom pacienti vykazovali významné zlepšenie rovnováhy, koordinácie, kontroly močového mechúra a čriev, sily horných a dolných končatín, únavy, vytrvalosti, spasticity a necitlivosti. Štatisticky boli zaznamenané výrazné zlepšenia pri chôdzi, stúpaní po schodoch, presunoch autom, presunoch na lôžko, presunoch na toaletu, presunoch vo vani a polohovaní postele. V inej klinickej štúdii Wesselius a spol. [69] odhalili, že liečba včelím jedom u pacientov s recidivujúcou sklerózou multiplex neznížila aktivitu ochorenia, invaliditu alebo únavu a nezlepšila kvalitu života.
Liu a kol. [70] uviedli, že aplikácia kombinovanej terapie včelím jedom s inými liekmi je pri liečbe reumatoidnej artritídy účinnejšia ako jednoduché použitie liekov. Tiež uviedli, že keď bola aplikovaná terapia včelím bodnutím, dávky západných liekov sa môžu znížiť a miera relapsov sa zníži.
Obrázok 4 [71,72,73,74,75,76,77,78,79,80,81,82,83,84] sumarizuje terapeutické účinky a spôsob pôsobenia včelieho jedu pri rôznych chorobách a stavoch. Účinky a akcie na obrázkoch sú podporené odkazmi.

Hoci existuje veľa presvedčivých výsledkov týkajúcich sa potenciálneho použitia včelieho jedu, konkrétnejšie melitínu, proti rôznym typom rakoviny, jeho použiteľnosť u ľudí zostáva veľmi náročná vzhľadom na jeho nešpecifickú cytotoxicitu [85].
Napriek širokému spektru terapeutického potenciálu včelieho jedu existuje paralelná realita potenciálnych vedľajších účinkov alebo alergických reakcií spojených s podávaním včelieho jedu [86].
3.3.1. Testovanie alergií, pokyny pre pacientov a kontraindikácie
Systémovo-alergické reakcie na včelie bodnutie boli preukázané až u 3,4 % detí a až u 7,5 % dospelých. Tieto alergické reakcie možno kategorizovať ako mierne a obmedzené na kožu alebo stredne závažné až závažné s rizikom život ohrozujúcej anafylaxie. Preto pred aplikáciou terapie včelím jedom by sa mal vykonať test na alergiu. Jedinou liečbou na elimináciu ďalších systémových reakcií na bodnutie jedom je imunoterapia jedom, ktorá je indikovaná na prevenciu ďalších stredne ťažkých až ťažkých systémových reakcií na bodnutie u detí a dospelých alergických na jed [87].
Na testovanie alergie sa asi 0,05 ml (1,0 mg čistého lyofilizovaného jedu rozpusteného v 1,0 ml fyziologického roztoku) vstrekne do flexorového povrchu predlaktia pacienta. Pomaly sa vstrekuje, aby sa vytvorila malá pologuľová kvapôčka. Ak sa do 15–30 minút po intradermálnej injekcii včelieho jedu neobjavia žiadne systémové reakcie, pacient sa v teste považuje za negatívneho. V prípade anafylaxie má pacient dostať intenzívnu lekársku starostlivosť, ktorá zahŕňa injekciu adrenalínu a/alebo dexametazónu. Pretože citlivosť na včelí jed sa u jednotlivých osôb líši, neexistuje všeobecný protokol pre všetkých pacientov, ktorí sú liečení včelím jedom. Pre citlivé osoby by sa mal použiť špecializovaný protokol. V prípade chronických zápalových porúch by sa na dosiahnutie najlepších výsledkov malo vykonať približne 12–20 sedení. Niektoré prípady vyžadujú dlhé obdobia liečby, ako napríklad reumatoidná artritída, psoriáza, roztrúsená skleróza a lupus. Pacientom sa odporúča, aby dodržiavali nasledujúce pokyny, aby dosiahli čo najlepšie výsledky [88].
a. 2–3 mg vitamínu C denne sa odporúča celoplošná liečba včelím jedom;
b. 650 mg acetaminofénu sa môže užívať v prípade horúčky a zimnice;
c. Počas terapie včelím jedom je prísne zakázaný alkohol;
d. Ľadový obklad možno aplikovať na miesto vpichu, ak sa vyskytla lokálna systémová reakcia (ako je opuch a/alebo škrabanie);
e. Ak sa vyskytli lokálne reakcie (anafylaxia), pacient by mal okamžite dostať subkutánnu injekciu adrenalínu (adrenalín) a potom by mal byť prevezený do nemocnice.

Aplikácia včelieho jedu pri liečbe ľudí je kontraindikovaná pri mnohých stavoch, ako sú deti do 5 rokov, tehotenstvo, dojčenie, akútne a chronické infekcie, po očkovaní, zlyhanie obličiek a pečene, srdcové a respiračné problémy, chronická tuberkulóza, hepatitída, akútna rakovina a diabetes mellitus 1. typu [88].
3.3.2. Cesta podávania včelieho jedu
Vzhľadom na bielkovinovú povahu včelieho jedu je podávanie orálnou cestou ťažké, pretože ho tráviace enzýmy môžu stráviť [4]. Terapia včelím jedom sa môže podávať rôznymi spôsobmi, ako je priame bodnutie včelami do špecifických bodov, injekcia vyčisteného a sterilného včelieho jedu, masti, krémy, pilulky, kvapky, homeopatické prípravky Apis, elektroforéza a fonoforéza (obrázok 5). Za tradičnú metódu liečby sa považuje terapia priamym bodnutím včiel medonosnou. Má viacero nevýhod, ako je bolesť a zápal spôsobený bodnutím, ťažkosti s udržiavaním jeho pravidelných koncentrácií v krvi, potreba dlhodobého podávania série bodnutí alebo injekcií z dôvodu krátkeho polčasu melitínu a ťažkosti s pacientov [89]. Relatívne krátky plazmatický polčas včelieho jedu a problematická povaha stanovenia jeho definitívnej dávky viedli výskumníkov a odborníkov k podpore a vývoju iných alternatív, ako je kombinácia s polymérmi alebo nanočasticami (NP) [90].

3.3.3. Terapia včelím jedom v nemocniciach
Najznámejšia skúsenosť s terapiou včelím jedom bola v ruských nemocniciach. Tabuľka 1 ukazuje skúsenosti Dr. Krylova a jeho kolegov [91] s použitím terapie včelím jedom pri liečbe roztrúsenej sklerózy v Čeľabinskom centre pre sklerózu multiplex v Rusku. Okrem toho ruský apiterapeut Dr. Ludyanski liečil rôzne ochorenia [73] v ruskej nemocnici pomocou včelieho jedu (tabuľka 2).

3.3.4. Nežiaduce účinky včelieho jedu
Hoci boli preukázané terapeutické účinky včelieho jedu, jeho bezpečnosť je stále silne limitujúcim faktorom [2]. Nežiaduce účinky včelieho jedu siahajú od miernych kožných reakcií, ktoré sa po niekoľkých dňoch zotavia, až po život ohrozujúce ťažké alebo smrteľné anafylaktické reakcie. V roku 2015 systematický prehľad a metaanalýza hodnotili nežiaduce účinky liečby včelím jedom. Spomedzi 145 štúdií sa nežiaduce udalosti vyskytli v 58 štúdiách [64]. Tieto nežiaduce udalosti zahŕňajú imunologické systémové reakcie, lokálne svrbenie alebo opuch, alergiu, bolesť, kožné problémy a nešpecifické reakcie [64]. Okrem toho sa môže vyskytnúť akútny anafylaktický šok, hemolýza, Guillaume-Barreov syndróm a ireverzibilné poškodenie ulnárneho nervu [86]. Nežiaduce účinky včelieho jedu možno pripísať precitlivenosti [92,93], pretrvávajúcemu lokálnemu zápalu [94], frekvencii podávania včelieho jedu a koncentrácii jedu [2].
Naproti tomu Kim a spol. [95] zistili, že subkutánna injekcia včelieho jedu a jeho frakcií nemala pri najvyššej testovanej dávke (200-krát a 100-krát vyššej) žiadne významné vedľajšie účinky na celkové fyziologické funkcie centrálnych nervov, ako aj kardiovaskulárne respiračné a gastrointestinálne funkcie dávky, než aké sa používajú klinicky). Podľa výsledkov takejto štúdie sú dávky včelieho jedu v terapeutickom rozsahu alebo vyššie v klinických štúdiách bezpečné a môžu sa použiť ako bezpečné antinociceptívne a protizápalové činidlá.
Je dobre známe, že uštipnutie včelou a injekcia včelieho jedu spôsobujú okrem zápalu aj bolesť [96]. Veľa hromadiacich sa dôkazov podporuje hypotézu, že melitín je hlavnou zložkou včelieho jedu, ktorá spôsobuje bolesť [97]. Chen a kol. [97] odhalili, že subkutánna injekcia melittínu spôsobuje pocit tonickej bolesti u zvierat aj u ľudí. Táto schopnosť vyvolať bolesť môže byť sprostredkovaná priamou alebo nepriamou aktiváciou primárnych nociceptorových buniek melitínom.
Medzi ďalšie nepriaznivé účinky včelieho jedu a melitínu patrí hemolýza kvôli ich vysokej lytickej aktivite na ľudské erytrocytové bunky [45,98]. Okrem toho je melitín cytotoxický pre ľudské lymfocyty periférnej krvi spôsobom závislým od dávky a času. Vedie ku granulácii, morfologickým zmenám a nakoniec k lýze buniek [45,99].

3.4. Produkty včelieho jedu
V západných krajinách sú injekčné formy včelieho jedu alternatívou k niektorým liekom, ktoré majú vedľajšie účinky. To platí najmä pre reumatoidnú artritídu. V závislosti od typu ochorenia možno včelí jed použiť vo forme krémových [73, 100] tabliet alebo mastí [101]. Iné liekové formy pozostávajú zo zmesi včelieho jedu so sterilnými injekčnými tekutinami a ich plnením do sklenených liekoviek alebo striekačiek. Okrem toho sa suchý jed udržiava lyofilizovaný a potom sa zmieša s rozpúšťadlom v čase injekcie [102]. V Európe a Číne sa roztoky včelieho jedu používajú aj s elektroforézou alebo ultrasonoforézou. Niektorí výrobcovia pridávali do včelieho jedu niektoré ďalšie včelie produkty (ako je peľový propolis, med a materská kašička), aby dosiahli výrazné účinky. Tabuľka 3 zobrazuje niektoré produkty dostupné na trhoch, ako aj ich dávkovú formu, indikácie a výrobcov.

3.5. Licencovanie včelieho jedu ako lieku
V západoeurópskych a severoamerických krajinách existuje len jedna legálne schválená injekčná forma včiel na znecitlivenie osôb, ktoré sú hyperalergické na včelí jed [102]. Injekcia včelieho jedu bola schválená ako bioterapeutický liek juhokórejskou správou potravín a liekov (Juhokórejský FDA), ale v Spojených štátoch (USA) čaká na schválenie FDA. V Spojených štátoch a na celom svete je veľa známych apiterapeutov, ktorí aplikujú apiterapiu, ako napríklad Bodog F. Beck, M.D. (New York); Raymond Carey, M.D. (Kalifornia); Stephan Stangaciu, M.D. (Rumunsko); H. O’Connell, M.D. (Connecticut); Joseph Broadman, M.D. (New York); L. A. Doyle, M. D. (Iowa); Christopher M-H Kim, M.D. (Južná Kórea); Joseph Saine, M.D. (Montreal); a Charles Mraz, majster včelár (Vermont).

3.6. Potenciál včelieho jedu naloženého na polyméroch a nanočasticiach (NP)
Pretože bodnutie včelou a injekcie včelieho jedu majú mnoho nevýhod, bol by potrebný návrh vhodného systému s postupným uvoľňovaním, ktorý poskytuje dlhodobý a konštantný terapeutický účinok. Nedávno boli NP pripravené z biodegradovateľných polymérov, ako je poly-D, kyselina L-mliečna-ko-glykolová (PLGA), alginát a chitosan. Tieto polyméry a ich NP sú vynikajúcimi a účinnými nosičmi pre bioaktívne zlúčeniny. Včelí jed tak môže byť nanesený na tieto polyméry a ich NP, aby sa zlepšilo jeho dodávanie a uvoľňovanie, čo vedie k zlepšenej kompliancii pacienta odstránením potreby častých injekcií. Čas degradácie pre NP môže byť kontrolovaný z dní na roky zmenou typu a množstva polymérov, molekulových hmotností polymérov alebo štruktúr NP. Včelí jed si môže udržať predĺžené uvoľňovanie a účinnosť po dlhú dobu pomocou takýchto polymérnych NP, čo znižuje interval podávania a komplianciu pacienta [89,103].
V rovnakom ohľade Qiao a kol. [104] skúmali interakcie medzi včelím jedom a kopolymérom poly(dl-laktid-ko-glykolid-b-etylénglykol-b-dl-laktid-ko-glykolid) (PLGA–PEG–PLGA). Všimli si, že uvoľňovanie včelieho jedu bolo znížené a hydrogél bol slabo degradovaný, zatiaľ čo vyvinuté biologické aktivity boli zachované [104].
V inom spôsobe podávania liečiva Xing a kol. [90] navrhli novú formuláciu na perorálne podávanie s použitím potiahnutých lipozómov a peptidov včelieho jedu potiahnutých gélovými guľôčkami z alginátu vápenatého ako modelového lieku na dodávanie lieku špecifického pre hrubé črevo. V takýchto podmienkach bol včelí jed chránený pred úplným uvoľnením v žalúdku a tenkom čreve. Zistilo sa, že čas príchodu tabliet do hrubého čreva je 4–5 hodín. Výsledky jasne ukázali, že potiahnutý lipozóm zachytený gélovými guľôčkami z alginátu vápenatého je potenciálnym systémom na dodávanie liečiva špecifického pre hrubé črevo.
V roku 2018 Lee a jeho kolegovia [105] vyhodnotili účinnosť chitosanových/alginátových NP na zapuzdrenie včelieho jedu a ich účinnosť proti vírusu reprodukčného a respiračného syndrómu ošípaných. Vo svojej štúdii Lee a jeho kolegovia zistili, že NP odvodené z nosa boli schopné vyvolať imunitnú odpoveď pomocných T buniek typu 1 (Th1) a zvýšiť produkciu klastrovej diferenciácie (CD4+), T lymfocyty, populácie pamäťových T buniek, cytokíny (interferón – y (IFN-y) a IL-12) a transkripčné faktory, ako je prevodník signálu a aktivátor transkripcie 4 (STAT4) a T-box exprimovaný v T bunkách (T-bet). Podobne tieto nazálne odvodené NP spôsobili zníženie T regulačných buniek, cytokínov (IL-10 a transformujúci rastový faktor-β (TGF-β)) a transkripčných faktorov (prevodník signálu a aktivátor transkripcie 5 (STAT5) a Forkhead box proteín P3 (Foxp3)).
Alalawy a kol. [103] zistili, že nanesenie včelieho jedu na nano-hubový chitosan zvýšilo protirakovinovú biologickú aktivitu proti bunkám karcinómu krčka maternice (HeLa) a mohlo by vyvolať vážne príznaky apoptózy v bunkách HeLa spôsobom závislým od času a dávky.
Výskumníci z Washingtonskej univerzity v St. Louis ukázali, že NP prenášajúce včelí jed účinne ničia HIV, pričom okolité bunky nechávajú nepoškodené [106]. Navyše nanovlákna naplnené včelím jedom a propolisom vykazovali široké spektrum antibakteriálnych aktivít [45].

4. Závery a perspektívy do budúcnosti
   Včelí jed a jeho zložky majú široké spektrum biologických a farmakologických aktivít. Bol podrobený klinickým aplikáciám apiterapeutov na liečbu mnohých chorôb. Bola licencovaná na humánnu terapiu v rôznych krajinách a teraz je dostupná na trhoch v rôznych formách. Plnenie včelieho jedu a jeho zložky melittín polymérmi a ich nanoformami udržuje dlhodobé uvoľňovanie a zvyšuje účinnosť včelieho jedu. Využitie včelieho jedu naloženého na NP je však zatiaľ na úrovni experimentálnych a predklinických štúdií. Táto štúdia teda vyžaduje spoluprácu medzi výskumníkmi a klinickými lekármi s cieľom posúdiť bezpečnosť a účinnosť včelieho jedu a ich zložkových peptidov naložených na NP pri liečbe ľudských chorôb.
5. Materiály a metódy
   Články publikované do júna 2021 sme v PubMed, Scopus, Google Scholar a Web of Science hľadali s použitím nasledujúcich nadpisov a kľúčových slov samostatne alebo v rôznych kombináciách: „Včelí jed“, „Štúdie in vitro“, „Štúdie in vivo“ , „Farmakologické účinky“, „Klinická aplikácia“, „Akupunktúrne body“, „Akupunktúra“ a „Apiterapia“. Články vybrané na zahrnutie na zhromažďovanie a zhromažďovanie informácií do prehľadového článku zahŕňajú recenzované články, ktoré majú identifikátor digitálneho objektu (DOI) a medzinárodné štandardné sériové číslo (ISSN), ako aj kapitoly kníh s medzinárodným štandardným číslom knihy (ISBN). . Kritériá vylúčenia zahŕňajú nerecenzovanú literatúru, články, ktorých úplný text nebol dostupný, články nesúvisiace so včelím jedom, články s obmedzenými informáciami, články duplikované medzi databázami, abstrakty z konferencií a stiahnuté články.
   Autorské príspevky
   A.K., B.H.E., T.M.A. a O.M.A. podieľal sa na príprave návrhu verzie rukopisu. A.K., B.H.E., T.M.A. a O.M.A. zrevidovali konečnú verziu rukopisu, ktorý sa predkladá časopisu. Všetci autori si prečítali publikovanú verziu rukopisu a súhlasili s ňou.

Financovanie:
Tento výskum nezískal žiadne externé financovanie.
Vyhlásenie inštitucionálnej revíznej rady:
Nepoužiteľné.
Vyhlásenie informovaného súhlasu:
Nepoužiteľné.
Vyhlásenie o dostupnosti údajov:
Údaje uvedené v tejto štúdii sú k dispozícii na požiadanie od príslušného autora.
Konflikt záujmov:
Autori nedeklarujú žiadny konflikt záujmov.

Referencie

1. Ahmed, O.; Fahim, H.; Mahmoud, A.; Eman Ahmed, E.A. Bee venom and hesperidin effectively mitigate complete Freund’s adjuvant-induced arthritis via immunomodulation and enhancement of antioxidant defense system. Arch. Rheumatol. 2017, 33, 198–212. [Google Scholar] [CrossRef]
2. Zhang, S.; Liu, Y.; Ye, Y.; Wang, X.R.; Lin, L.T.; Xiao, L.Y.; Zhou, P.; Shi, G.X.; Liu, C.Z. Bee venom therapy: Potential mechanisms and therapeutic applications. Toxicon 2018, 148, 64–73. [Google Scholar] [CrossRef]
3. Wehbe, R.; Frangieh, J.; Rima, M.; El Obeid, D.; Sabatier, J.M.; Fajloun, Z. Bee Venom: Overview of Main Compounds and Bioactivities for Therapeutic Interests. Molecules 2019, 24, 2997. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed][Green Version]
4. Carpena, M.; Nuñez-Estevez, B.; Soria-Lopez, A.; Simal-Gandara, J. Bee Venom: An Updating Review of Its Bioactive Molecules and Its Health Applications. Nutrients 2020, 12, 3360. [Google Scholar] [CrossRef]
5. El-Banby, M.A. Honeybees in the Koran and in Medicine; Al-Ahram Centre for Translation and Publication: Cairo, Egypt, 1994; p. 268. (In Arabic) [Google Scholar]
6. Mraz, C. Health and the Honeybee; Queen City Publications: Burlington, VT, USA, 1995. [Google Scholar]
7. Rose, A. Bees in Balance; Starboint Enterprises, Ltd.: Bethesda, MD, USA, 1994. [Google Scholar]
8. Bogdanov, S. Biological and Therapeutic Properties of Bee Venom. In The Bee Venom Book; Bee Product Science: Bern, Switzerland, 2016; pp. 1–23. Available online: https://www.researchgate.net/publication/304011827_Biological_and_therapeutic_properties_of_bee_venom (accessed on 1 April 2016).
9. Urtubey, N. Apitoxin: From Bee Venom to Apitoxin for Medical Use; Termas de Rio Grande Santiago del Estero: Rio Hondo, Argentina, 2005. [Google Scholar]
10. Hauser, R.A.; Daguio, M.; Wester, D.; Hauser, M.; Kirchman, A.; Skinkis, C. Bee-venom therapy for treating multiple sclerosis: A clinical trial. Altern. Complementary Ther. 2004, 7, 37. [Google Scholar] [CrossRef]
11. Rho, Y.H.; Woo, J.H.; Choi, S.J.; Lee, Y.H.; Ji, J.D.; Song, G.G. A new onset of systemic lupus erythematosus developed after bee venom therapy. Korean J. Intern. Med. 2009, 24, 283–285. [Google Scholar] [CrossRef]
12. Oršolić, N. Bee venom in cancer therapy. Cancer Metastasis Rev. 2012, 31, 173–194. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]
13. Kingsland, J. Honeybee Venom Kills Aggressive Breast Cancer Cells; Sherrell, Z., Ed.; MPH; Healthline Media UK Ltd.: Brighton, UK, A Red Ventures Company; 7 September 2020; Available online: https://www.medicalnewstoday.com/articles/honeybee-venom-kills-aggressive-breast-cancer-cells (accessed on 7 September 2020).
14. Duffy, C.; Sorolla, A.; Wang, E.; Golden, E.; Woodward, E.; Davern, K.; Ho, D.; Johnstone, E.; Pfleger, K.; Redfern, A.; et al. Honeybee venom and melittin suppress growth factor receptor activation in HER2-enriched and triple-negative breast cancer. NPJ Precis. Oncol. 2020, 4, 24. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]
15. Kim, H.; Keum, D.J.; Kwak, J.W.; Chung, H.-S.; Bae, H. Bee Venom Phospholipase A2 Protects against Acetaminophen-Induced Acute Liver Injury by Modulating Regulatory T Cells and IL-10 in Mice. PLoS ONE 2014, 9, e114726. [Google Scholar] [CrossRef]
16. Abd El-Rahim, A.H.; Abd-El-Moneim, O.M.; Abd El-Kader, H.A.; Abd El Raouf, A. Inhibitory effect of bee venom against potassium bromate causing genetic toxicity and biochemical alterations in mice. J. Arab. Soc. Med. Res. 2018, 13, 89–98. [Google Scholar] [CrossRef]
17. Hassan, S.A.; Alazragi, R.S.; Salem, N.A. Potential Therapeutic effect of Bee Venom on Cisplatin-Induced Hepatotoxicity. J. Pharm. Res. Int. 2021, 33, 200–210. [Google Scholar] [CrossRef]
18. Akre, R.D.; Reed, H.C. Ants, Wasps and Bees: In the Textbook of Medical and Veterinary Entomology, 2nd ed.; Academic Press: San Diego, CA, USA, 2009; pp. 383–410. [Google Scholar]
19. Casewell, N.R.; Wuster, W.; Vonk, F.J.; Harrison, R.A.; Fry, B.G. Complex cocktails: The evolutionary novelty of venoms. Trends Ecol. Evol. 2013, 28, 219–229. [Google Scholar] [CrossRef]
20. Moreau, S.J.M.; Asgari, S. Venom proteins from parasitoid wasps and their biological functions. Toxins 2015, 7, 2385–2412. [Google Scholar] [CrossRef][Green Version]
21. Danneels, E.L.; van Vaerenbergh, M.; Debyser, G.; Devreese, B.; de Graaf, D.C. Honeybee venom proteome profile of queens and winter bees as determined by a mass spectrometric approach. Toxins 2015, 7, 4468–4483. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed][Green Version]
22. Moreau, S.J.M.; Vinchon, S.; Cherqui, A.; Prevost, G. Components of Asobara venoms and their effects on hosts. Adv. Parasitol. 2009, 70, 217–232. [Google Scholar] [PubMed]
23. Pucca, M.B.; Cerni, F.A.; Janke, R.; Bermúdez-Méndez, F.; Ledsgaard, L.; Barbosa, J.E.; Laustsen, A.H. Bee updated: Current knowledge on bee venom and bee envenoming therapy. Front. Immunol. 2019, 10, 2090. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed][Green Version]
24. Raghuraman, H.; Chattopadhyay, A. Melittin: A membrane-active peptide with diverse functions. Biosci. Rep. 2007, 27, 189S–223S. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]
25. Moreno, M.; Giralt, E. Three valuable peptides from bee and wasp venoms for therapeutic and biotechnological use: Melittin, apamin and mastoparan. Toxins 2015, 7, 1126–1150. [Google Scholar] [CrossRef][Green Version]
26. Gajski, G.; Garaj-Vrhovac, V. Melittin: A lytic peptide with anticancer properties. Environ. Toxicol. Pharmacol. 2013, 36, 697–705. [Google Scholar] [CrossRef]
27. Im, E.J.; Kim, S.J.; Hong, S.B.; Park, J.K.; Rhee, M.H. Anti-inflammatory activity of bee venom in BV2 microglial cells: Mediation of MyD88-dependent NF-6B signaling pathway. Evid.-Based Complement. Altern. Med. 2016, 2016, 3704764. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed][Green Version]
28. Ali, M.A.M. Studies on bee venom and its medical uses. Int. J. Adv. Res. Technol. 2012, 1, 1–15. [Google Scholar]
29. NIH. Apitherapy, Alternative Medicine: Expanding Medical Horizons; NIH Pub.: Bethesda, MD, USA, 1995; pp. 172–175. [Google Scholar]
30. Bhalotia, S.; Kumar, N.R.; Kaur, J.; Devi, A. Honey bee venom and its composition: Focusing on different apis species—A review. J. Basic Appl. Eng. Res. 2016, 3, 96–98. [Google Scholar]
31. Szabat, P.; Poleszak, J.; Szabat, M.; Boreński, G.; Wójcik, M.; Milanowska, J. Apitherapy—The medical use of bee products. J. Educ. Health Sport 2019, 9, 384–396. [Google Scholar]
32. Kolayli, S.; Keskin, M. Natural bee products and their apitherapeutic applications. Stud. Nat. Prod. Chem. 2020, 66, 175–196. [Google Scholar]
33. Badawi, J.K. Bee Venom Components as Therapeutic Tools against Prostate Cancer. Toxins 2021, 13, 337. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]
34. Meier, J.; White, J. Handbook of Clinical Toxicology of Animal Venoms; CRC Press: New York, NY, USA, 1995. [Google Scholar]
35. Minton, S.A. Venom Disease; Charles C Thomas: Springfield, IL, USA, 1974. [Google Scholar]
36. Habermehl, G.G. Venomous Animals and Their Toxins; Springer: New York, NY, USA, 1981. [Google Scholar]
37. Cornara, L.; Biagi, M.; Xiao, J.; Burlando, B. Therapeutic properties of bioactive compounds from different honeybee products. Front. Pharmacol. 2017, 8, 412. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]
38. Sobral, F.; Sampaio, A.; Falcão, S.; Queiroz, M.J.R.P.; Calhelha, R.C.; Vilas-Boas, M.; Ferreira, I.C.F.R. Chemical characterization, antioxidant, anti-inflammatory and cytotoxic properties of bee venom collected in Northeast Portugal. Food Chem. Toxicol. 2016, 94, 172–177. [Google Scholar] [CrossRef][Green Version]
39. Somwongin, S.; Chantawannakul, P.; Chaiyana, W. Antioxidant activity and irritation property of venoms from Apis species. Toxicon 2018, 145, 32–39. [Google Scholar] [CrossRef]
40. El-Hanoun, A.; El-Komy, A.; El-Sabrout, K.; Abdella, M. Effect of bee venom on reproductive performance and immune response of male rabbits. Physiol. Behav. 2020, 223, 112987. [Google Scholar] [CrossRef]
41. Mohamed, W.A.; Abd-Elhakim, Y.M.; Ismail, S.A.A. Involvement of the anti-inflammatory, anti-apoptotic, and anti-secretory activity of bee venom in its therapeutic e_ects on acetylsalicylic acid-induced gastric ulceration in rats. Toxicology 2019, 419, 11–23. [Google Scholar] [CrossRef]
42. Lee, Y.J.; Oh, M.J.; Lee, D.H.; Lee, Y.S.; Lee, J.; Kim, D.H.; Choi, C.H.; Song, M.J.; Song, H.S.; Hong, J.T. Anti-inflammatory effect of bee venom in phthalic anhydride-induced atopic dermatitis animal model. Inflammopharmacology 2020, 28, 253–263. [Google Scholar] [CrossRef]
43. Klocek, G.; Schulthess, T.; Shai, Y.; Seelig, J. Thermodynamics of melittin binding to lipid bilayers. Aggregation and pore formation. Biochemistry 2009, 48, 2586–2596. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]
44. Lee, W.R.; Kim, K.H.; An, H.J.; Kim, J.Y.; Chang, Y.C.; Chung, H.; Park, Y.Y.; Lee, M.L.; Park, K.K. The protective effects of melittin on propionibacterium acnes-induced inflammatory responses in vitro and in vivo. J. Investig. Dermatol. 2014, 134, 1922–1930. [Google Scholar] [CrossRef][Green Version]
45. Lee, G.; Bae, H. Anti-Inflammatory Applications of Melittin, a Major Component of Bee Venom: Detailed Mechanism of Action and Adverse Effects. Molecules 2016, 21, 616. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]
46. Son, D.J.; Lee, J.W.; Lee, Y.H.; Song, H.S.; Lee, C.K.; Hong, J.T. Therapeutic application of antiarthritis, pain-releasing, and anti-cancer effects of bee venom and its constituent compounds. Pharmacol. Ther. 2007, 115, 246–270. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]
47. Ahmed, O.M.; Ebaid, H.; El-Nahass, E.-S.; Ragab, M.; Alhazza, I.M. Nephroprotective Effect of Pleurotus ostreatus and Agaricus bisporus Extracts and Carvedilol on Ethylene Glycol-Induced Urolithiasis: Roles of NF-κB, p53, Bcl-2, Bax and Bak. Biomolecules 2020, 10, 1317. [Google Scholar] [CrossRef]
48. Aufschnaiter, A.; Kohler, V.; Khalifa, S.; Abd El-Wahed, A.; Du, M.; El-Seedi, H.; Büttner, S. Apitoxin and Its Components against Cancer, Neurodegeneration and Rheumatoid Arthritis: Limitations and Possibilities. Toxins 2020, 12, 66. [Google Scholar] [CrossRef][Green Version]
49. Pahl, H.L. Activators and target genes of Rel/NF-κB transcription factors. Oncogene 1999, 18, 6853–6866. [Google Scholar] [CrossRef][Green Version]
50. Park, M.H.; Choi, M.S.; Kwak, D.H.; Oh, K.W.; Yoon, D.Y.; Han, S.B.; Song, H.S.; Song, M.J.; Hong, J.T. Anti-cancer effect of bee venomin prostate cancer cells through activation of caspase pathway via inactivation of NF-κB. Prostate 2011, 71, 801–812. [Google Scholar] [CrossRef]
51. Liu, X.; Chen, D.; Xie, L.; Zhang, R. E_ect of honey bee venom on proliferation of K1735M2 mouse melanoma cells in-vitro and growth of murine B16 melanomas in-vivo. J. Pharm. Pharmacol. 2002, 54, 1083–1089. [Google Scholar] [CrossRef]
52. Saidemberg, D.M.; Baptista-Saidemberg, N.B.; Palma, M.S. Chemometric analysis of Hymenoptera toxins and defensins: A model for predicting the biological activity of novel peptides from venoms and hemolymph. Peptides 2011, 32, 1924–1933. [Google Scholar] [CrossRef][Green Version]
53. Jung, G.B.; Huh, J.-E.; Lee, H.J.; Kim, D.; Lee, G.J.; Park, H.K.; Lee, J.D. Anti-cancer effect of bee venom on human MDA-MB-231 breast cancer cells using Raman spectroscopy. Biomed. Opt. Express 2018, 9, 5703–5718. [Google Scholar] [CrossRef]
54. Hong, J.; Lu, X.; Deng, Z.; Xiao, S.; Yuan, B.; Yang, X. How Melittin inserts into cell membrane: Conformational changes, inter-peptide cooperation, and disturbance on the membrane. Molecules 2019, 24, 1775. [Google Scholar] [CrossRef][Green Version]
55. Zheng, J.; Lee, H.L.; Ham, Y.W.; Song, H.S.; Song, M.J.; Hong, J.T. Anti-cancer e_ect of bee venom on colon cancer cell growth by activation of death receptors and inhibition of nuclear factor kappa B. Oncotarget 2015, 6, 44437–44451. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]
56. Li, B.; Li, L.Y.; Luo, X.; Wang, X. Endonuclease G is an apoptotic DNase when released from mitochondria. Nature 2001, 412, 95–99. [Google Scholar] [CrossRef]
57. Kroemer, G.; Martin, S.J. Caspase-independent cell death. Nat. Med. 2005, 11, 725–730. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]
58. Leandro, L.F.; Mendes, C.A.; Casemiro, L.A.; Vinholis, A.H.; Cunha, W.R.; De Almeida, R.; Martins, C.H. Antimicrobial activity of apitoxin, melittin and phospholipase A2 of honey bee (Apis mellifera) venom against oral pathogens. An. Acad. Bras. Ciências 2015, 87, 147–155. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed][Green Version]
59. Pucca, M.B.; Ahmadi, S.; Cerni, F.A.; Ledsgaard, L.; Sørensen, C.V.; McGeoghan, F.T.S.; Stewart, T.; Schoof, E.; Lomonte, B.; Auf dem Keller, U.; et al. Unity Makes Strength: Exploring Intraspecies and Interspecies Toxin Synergism between Phospholipases A₂ and Cytotoxins. Front. Pharmacol. 2020, 11, 611. [Google Scholar] [CrossRef]
60. Yang, L.; Harroun, T.A.; Weiss, T.M.; Ding, L.; Huang, H.W. Barrel-stave model or toroidal model? A case study on melittin pores. Biophys. J. 2001, 81, 1475–1485. [Google Scholar] [CrossRef][Green Version]
61. Uddin, M.B.; Lee, B.H.; Nikapitiya, C.; Kim, J.H.; Kim, T.H.; Lee, H.C.; Kim, C.G.; Lee, J.S.; Kim, C.J. Inhibitory effects of bee venom and its components against viruses in vitro and in vivo. J. Microbiol. 2016, 54, 853–866. [Google Scholar] [CrossRef]
62. Bachis, A.; Cruz, M.I.; Mocchetti, I. M-tropic HIV envelope protein gp120 exhibits a different neuropathological profile than T-tropic gp120 in rat striatum. Eur. J. Neurosci. 2010, 2, 570–578. [Google Scholar] [CrossRef][Green Version]
63. Sig, A.; Güney, M.; Öz Sig, Ö.; Şan, H. Bee venom: A medical perspective. Turk. J. Clin. Lab. 2019, 10, 414–421. [Google Scholar]
64. Park, J.H.; Yim, B.K.; Lee, J.-H.; Lee, S.; Kim, T.-H. Risk Associated with Bee Venom Therapy: A Systematic Review and Meta-Analysis. PLoS ONE 2015, 10, e0126971. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed][Green Version]
65. Kwon, Y.B.; Lee, J.D.; Lee, H.J.; Han, H.J.; Mar, W.C.; Kang, S.K.; Beitz, A.J.; Lee, J.H. Bee venom injection into an acupuncture point reduces arthritis associated edema and nociceptive responses. Pain 2001, 90, 271–280. [Google Scholar] [CrossRef]
66. Pawelek, J. Urban Bee Gardens Archived 2010-05-01 at the Wayback Machine Urban Bee Legends. Available online: https://web.archive.org/web/20100501141312/http://nature.berkeley.edu/urbanbeegardens/general_legends.html (accessed on 1 May 2010).
67. Lin, T.-Y.; Hsieh, C.-L. Clinical Applications of Bee Venom Acupoint Injection. Toxins 2020, 12, 618. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]
68. Cho, S.Y.; Shim, S.R.; Rhee, H.Y.; Park, H.J.; Jung, W.S.; Moon, S.K.; Park, J.M.; Ko, C.N.; Cho, K.H.; Park, S.U. Effectiveness of acupuncture and bee venom acupuncture in idiopathic Parkinson’s disease. Park. Relat. Disord. 2012, 18, 948–952. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]
69. Wesselius, T.; Heersema, D.J.; Mostert, J.P.; Heerings, M.; Admiraal-Behloul, F.; Talebian, A.; van Buchem, A.; De Keyser, J. A randomized crossover study of bee sting therapy for multiple sclerosis. Neurology 2005, 65, 1764. [Google Scholar] [CrossRef]
70. Liu, S.; Yu, M.; He, Y.; Xiao, L.; Wang, F.; Song, C.; Sun, S.; Ling, C.; Xu, Z. Melittin prevents liver cancer cell metastasis through inhibition of the Rac1-dependent pathway. Hepatology 2008, 47, 1964–1973. [Google Scholar] [CrossRef]
71. Asafova, N.; Orlov, B.; Kozin, R. Physiologically Active Bee Products; Y.A. Nikolaev: Nijnij Novgorod, Russia, 2001; p. 360. (In Russian) [Google Scholar]
72. Krylov, V. Pcelni Yad (Bee Venom in Russian); Nizhny Novgorod University: Nizhny Novgorod, Russia, 1995; p. 221. [Google Scholar]
73. Ludyanskil, E.A. Apiterapia; Poligrafist: Vologda, Russia, 1994; p. 460. [Google Scholar]
74. Shkenderov, S.; Ivanov, T. Pcelni Produkti, The Bee Products (in Bulgarian); Zemizdat: Sofia, Bulgaria, 1983; pp. 1–238. [Google Scholar]
75. Kang, S.Y.; Roh, D.H.; Kim, H.W.; Han, H.J.; Beitz, A.J.; Lee, J.H. Blockade of Adrenal Medulla- Derived Epinephrine Potentiates Bee Venom-Induced Antinociception in the Mouse Formalin Test: Involvement of Peripheral beta-Adrenoceptors. Evid. Based Complement. Altern. Med. 2013, 2013, 809062. [Google Scholar] [CrossRef]
76. Kang, S.; Roh, D.; Moon, J.; Kim, H.; Lee, H.; Beith, A.; Lee, J. Repetitive Treatment With Diluted Bee Venom Reduces Neuropathic Pain Via Potentiation of Locus Coeruleus Noradrenergic Neuronal Activity and Modulation of Spinal NR1 Phosphorylation in Rats. J. Pain 2012, 13, 155–166. [Google Scholar] [CrossRef]
77. Karimi, A.; Parivar, K.; Nabiuni, M.; Haghighi, S.; Imani, S.; Afrouzi, H. Effect of honey bee venom on Lewis rats with experimental allergic encephalomyelitis as regards changes of GABA and glutamate. J. Am. Sci. 2011, 7, 295–300. [Google Scholar]
78. Lim, B.S.; Moon, H.J.; Li, D.X.; Gil, M.; Min, J.K.; Lee, G.; Bae, H.; Kim, S.K.; Min, B.I. Effect of bee venom acupuncture on oxaliplatin-induced cold allodynia in rats. Evid. Based Complement. Altern. Med. 2013, 2013, 369324. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]
79. Chung, K.; An, H.; Cheon, S.; Kwon, K.; Lee, K. Bee venom suppresses testosterone-induced benign prostatic hyperplasia by regulating the inflammatory response and apoptosis. Exp. Biol. Med. 2015, 240, 656–1663. [Google Scholar] [CrossRef][Green Version]
80. Park, J.H.; Kim, K.H.; Kim, S.J.; Lee, W.R.; Lee, K.G.; Park, K.K. Bee Venom Protects Hepatocytes from Tumor Necrosis Factor-alpha and Actinomycin D. Arch. Pharmacal Res. 2010, 33, 215–223. [Google Scholar] [CrossRef]
81. Han, S.M.; Park, K.K.; Nicholis, Y.M.; Macfarlane, N.; Duncan, G. Effects of honeybee (Apis mellifera) venom on keratinocyte migration in vitro. Pharmacogn. Mag. 2013, 9, 220–226. [Google Scholar] [CrossRef][Green Version]
82. Cheon, S.; Chung, K.; Lee, K.; An, H. Bee venom suppresses the differentiation of preadipocytes and high fat diet-induced obesity through inhibiting adipogenesis. Integr. Med. Res. 2015, 4, 55–56. [Google Scholar] [CrossRef][Green Version]
83. Mousavi, S.M.; Imani, S.; Haghighi, S.; Mousavi, S.E.; Karimi, A. Effect of Iranian Honey bee (Apis mellifera) Venom on Blood Glucose and Insulin in Diabetic Rats. J. Arthropod-Borne Dis. 2012, 6, 136–143. [Google Scholar]
84. Kim, K.H.; Lee, W.R.; An, H.J.; Kim, J.Y.; Chung, H.; Han, S.M.; Lee, M.L.; Lee, K.G.; Pak, S.C.; Park, K.K. Bee venom ameliorates compound 48/80-induced atopic dermatitis-related symptoms. Int. J. Clin. Exp. Pathol. 2013, 6, 2896–2903. [Google Scholar] [PubMed]
85. Gülmez, Y.; Aydın, A.; Can, I.; Tekin, S.; Cacan, E. Cellular toxicity and biological activities of honey bee (Apis mellifera L.) venom. Marmara Pharm. J. 2017, 21, 51–260. [Google Scholar] [CrossRef][Green Version]
86. Cherniack, E.P.; Govorushko, S. To bee or not to bee: The potential efficacy and safety of bee venom acupuncture in humans. Toxicon 2018, 154, 74–78. [Google Scholar] [CrossRef]
87. Sturm, G.J.; Varga, E.-M.; Roberts, G.; Mosbech, H.; Bilò, M.B.; Akdis, C.A.; Antolín-Amérigo, D.; Cichocka-Jarosz, E.; Gawlik, R.; Jakob, T.; et al. EAACI guidelines on allergen immunotherapy: Hymenoptera venom allergy. Allergy 2018, 73, 744–764. [Google Scholar] [CrossRef][Green Version]
88. Kim, C.M.H. Apitherapy—Bee Venom Therapy. In Biotherapy-History, Principles and Practice. A Practical Guide to the Diagnosis and Treatment of Disease using Living Organisms; Springer: Heidelberg, Germany, 2013; pp. 77–112. [Google Scholar]
89. Park, M.-H.; Kim, J.-H.; Jeon, J.-W.; Park, J.-K.; Lee, B.-J.; Suh, G.-H.; Cho, C.-W. Preformulation Studies of Bee Venom for the Preparation of Bee Venom-Loaded PLGA Particles. Molecules 2015, 20, 15072–15083. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed][Green Version]
90. Xing, L.; Dawei, C.; Liping, X.; Rongqing, Z. Oral colon-specific drug delivery for bee venom peptide: Development of a coated calcium alginate gel beads-entrapped liposome. J. Control Release 2003, 93, 293–300. [Google Scholar] [CrossRef]
91. Krylov, V.; Agafonov, A.; Kriftsov, N.; Lebedev, V.; Burimistrova, L.; Oshevenski, L.; Sokolski, S. Theory and Agents of Apitherapy; Chelyabinsk Russian Center: Moscow, Russia, 2007. (In Russian) [Google Scholar]
92. Bilò, B.M.; Bonifazi, F. Hymenoptera venom immunotherapy. Immunotherapy 2011, 3, 229–246. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]
93. Reisman, R.E. Late onset reactions following venom immunotherapy and venom skin tests. Ann. Allergy 1988, 61, 383–387. [Google Scholar]
94. Lee, C.W.; Cho, J.H.; Yu, H.J.; Yang, H.Y.; Park, C.K.; Park, M.H. Bee-sting granulomas in the skin. Dermatology 1996, 193, 355–356. [Google Scholar] [CrossRef]
95. Kim, H.W.; Kwon, Y.B.; Ham, T.W.; Roh, D.H.; Yoon, S.Y.; Kang, S.Y.; Yang, I.S.; Han, H.J.; Lee, H.J.; Beitz, A.J.; et al. General pharmacological profiles of bee venom and its water soluble fractions in rodent models. J. Vet. Sci. 2004, 5, 309–318. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]
96. Chen, J.; Lariviere, W.R. The nociceptive and anti-nociceptive effects of bee venom injection and therapy: A double-edged sword. Prog. Neurobiol. 2010, 92, 151–183. [Google Scholar] [CrossRef][Green Version]
97. Chen, J.; Guan, S.M.; Sun, W.; Fu, H. Melittin, the Major pain-producing substance of bee venom. Neurosci. Bull. 2016, 32, 265–272. [Google Scholar] [CrossRef][Green Version]
98. Tosteson, M.T.; Holmes, S.J.; Razin, M.; Tosteson, D.C. Melittin lysis of red cells. J. Membr. Biol. 1985, 87, 35–44. [Google Scholar] [CrossRef]
99. Gajski, G.; Domijan, A.M.; Zegura, B.; Stern, A.; Geric, M.; Novak Jovanovic, I.; Vrhovac, I.; Madunic, J.; Breljak, D.; Filipic, M.; et al. Melittin induced cytogenetic damage, oxidative stress and changes in gene expression in human peripheral blood lymphocytes. Toxicon 2016, 110, 56–67. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]
100. Sharma, H.C.; Singh, O.P. Medicinal properties of some lesser known but important bee products. In Proceedings of the 1980, 1983, 2nd Int. Conf. Apiculture in Trop. Climates; IBRA: New Delhi, India, 1983; pp. 694–702. [Google Scholar]
101. Singh, D. Bee venom. In Commercial Beekeeping (Production, Processing and Value Addition of Beehive Products for Income and Employment Generation); Scientific Publishers: Jodhpur, india, 2020; pp. 257–262. [Google Scholar]
102. Krell, R. Value-Added Products from Beekeeping; SAO Agricultural Services Bulletin; Food and Agriculture Organization of the United Nation: Rome, Italy, 1996. [Google Scholar]
103. Alalawy, A.I.; El Rabey, H.A.; Almutairi, F.M.; Tayel, A.A.; Al-Duais, M.A.; Zidan, N.S.; Sakran, M.I. Effectual Anticancer Potentiality of Loaded Bee Venom onto Fungal Chitosan Nanoparticles. Int. J. Polym. Sci. 2020, 2020, 2785304. [Google Scholar] [CrossRef]
104. Qiao, M.; Chen, D.; Hao, T.; Zhao, X.; Hu, H.; Ma, X. E_ect of bee venom peptide-copolymer interactions on thermosensitive hydrogel delivery systems. Int. J. Pharm. 2007, 345, 116–124. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]
105. Lee, J.; Kim, Y.M.; Kim, J.H.; Cho, C.W.; Jeon, J.W.; Park, J.K.; Lee, S.H.; Jung, B.G.; Lee, B.J. Nasal delivery of chitosan/alginate nanoparticle encapsulated bee (Apis mellifera) venom promotes antibody production and viral clearance during porcine reproductive and respiratory syndrome virus infection by modulating T cell related responses. Vet. Immunol. Immunopathol. 2018, 200, 40–51. [Google Scholar] [CrossRef] [PubMed]
106. Strait, J.E. Nanoparticles Loaded with Bee Venom Kill HIV. Washington NewsRoom, Washington University in St. Louis, Washington, USA. 2013. Available online: https://source.wustl.edu/2013/03/nanoparticles-loaded-with-bee-venom-kill-hiv/ (accessed on 7 March 2013).

Zdroj: https://www.mdpi.com/1420-3049/26/16/4941/htm