Čo je poškodenie pečene?
Poranenie pečene sa tiež nazýva tržná rana pečene, ktorá je výsledkom akéhokoľvek druhu traumy, ktorému čelila pečeň. Je to tiež najbežnejší typ poranenia brucha. Môže k tomu dôjsť v dôsledku preniknutia akéhokoľvek cudzieho predmetu, ako je nôž alebo guľka, alebo v dôsledku akéhokoľvek masívneho nárazu, ako je dopravná nehoda.
Spôsobené zranenie môže viesť k hematómu pečene alebo veľkým trhlinám, ktoré sa dostanú hlboko do pečene. Poranenie pečene sa môže stať smrteľným, ak dôjde k závažnému krvácaniu v dôsledku poškodenia veľkých krvných ciev prítomných v pečeni. Akýkoľvek druh krvácania, ku ktorému dochádza v dôsledku poškodenia pečene, sa odohráva vo vnútri brušnej dutiny.
Aké sú príznaky poškodenia pečene?
Poškodenie pečene možno ľahko zistiť pomocou nasledujúcich príznakov:
1. Subjekt prejaví symptómy šoku
2. Farba kože bude modrá alebo bledá
3. Srdcová frekvencia sa zvýši a povedie k zrýchlenému dýchaniu
4. Pretrvávajúca bolesť brucha
5. Opuch brucha (v dôsledku nahromadenia krvi)
6. Ako sú charakterizované poškodenia pečene?
7. Existujú rôzne spôsoby charakterizácie poškodenia pečene. Sú uvedené nižšie:
8. Lekári využívajú ultrasonografiu alebo CT (počítačová tomografia) na vyšetrenie poškodenia pečene.
9. Drobné poranenia pečene si vyžadujú čas, ale hoja sa samé – bez akejkoľvek liečby. Iba ťažké poranenia pečene vyžadujú chirurgický proces.
Fosfolipáza A2 z včelieho jedu chráni pred akútnym poškodením pečene spôsobeným acetaminofénom…
Úvod
Paracetamol, tiež známy ako acetaminofén, je jedným z najúčinnejších analgetík a antipyretických liekov, ktoré sa používajú na liečbu rôznych zdravotných problémov. Vo všeobecnosti je to bezpečný liek, keď sa používa terapeuticky, ale ak sa užíva vo vysokých dávkach – ľuďmi alebo zvieratami – môže viesť k ďalším léziám pečene, nefrotoxicite, závažnej nekróze pečene a dokonca k smrti. Niekoľkým výskumníkom sa úspešne podarilo objaviť mechanizmus zodpovedný za akútne poranenie vyvolané acetaminofénom, najmä signálne dráhy, ktoré vedú k toxicite a poškodeniu tkaniva v pečeni.
Zistilo sa, že Tregs (regulačné T bunky) hrajú zásadnú úlohu pri udržiavaní celkovej tolerancie imunitného systému. Preto akýkoľvek druh nedostatku Treg buniek môže viesť k autoimunitnému ochoreniu alebo ďalej zhoršiť existujúcu infekciu, chorobu alebo chorobu. Tieto bunky hrajú dôležitú úlohu pri podpore imunitného systému nášho tela pri akejkoľvek infekcii, alergii, nádorovej imunite a tolerancii transplantácie.
Podľa rôznych štúdií vykonaných skôr sa zistilo, že Tregs vytvárajú terapeutický účinok proti imunitne sprostredkovanému poškodeniu. Zistilo sa, že zápalový faktor s expresiou IL-10 je zvýšený v reakcii na poškodenie pečene vyvolané liečivom. Zvýšená citlivosť na acetaminofén priniesla poškodenie pečene, preukázala koreláciu so zvýšenou expresiou IL-6 a YNF – prozápalových cytokínov.
PLA2 získaný z včelieho jedu je prototypom enzýmu skupiny III, ktorý je zodpovedný za hydrolýzu mastných kyselín. Melittín je ďalšou podstatnou zložkou včelieho jedu, ktorý ďalej zvyšuje účinky PLA2. Rôzne klinické štúdie uskutočnené skôr preukázali, že PLA2 pomáha pri prevencii poranenia miechy a smrti nervových buniek.
V tomto klinickom vyšetrení sa pozornosť sústredila na preukázanie, že PLA2 zabraňuje dysfunkcii pečene a produkuje protizápalové cytokíny u myší s injekciou acetaminofénu. Zatiaľ možno predpokladať, že PLA2 môže vyvolať terapeutické účinky a ponúka ochranu proti hepatotoxicite vyvolanej acetaminofénom.
Metóda
Na uskutočnenie tohto experimentu sa samce myší C57BL/6, takmer 6 až 8 týždňov staré, získali z Charles River, Kórea. Každá myš vážila 20 až 21 gramov. Zatiaľ čo myši IL-10−/− (B10.129P2(B6)-Il10tm1Cgn/J, takmer 7 až 8 týždňov staré a samce myší Foxp3EGFPC57BL/6 (C. Cg-Foxp3tm2Tch/J, takmer 6 týždňov staré) boli získané z Jackson Laboratory, USA. Všetky myši boli chované v správnom klimatizačnom systéme s podmienkami bez patogénov a 12 hodinovým cyklom svetla a 12 hodín tmy. Tiež sa zabezpečilo, aby všetky myši mali dostatok potravy a vody. nastavenie tohto klinického experimentu bolo formálne schválené Výborom pre starostlivosť o zvieratá a použitie na Kyung Hee University. Vykonanie experimentálnych myší na konci tejto klinickej štúdie sa uskutočnilo prostredníctvom zadusenia CO2.
Liečba
Acetaminofén a PLA2 boli získané od Sigma Aldrich, USA. Všetkým myšiam sa intraperitoneálne injikovalo 0,2 mg/kg (podľa telesnej hmotnosti myší) PLA2 pred podaním injekcie acetaminofénu. Táto liečba sa podávala iba raz počas 5 dní. Na druhej strane kontrolná skupina tiež dostala rovnaké množstvo PBS. PBS a acetaminofén boli zmiešané v špeciálnej koncentrácii 20 mg/ml.
Posledná injekcia acetaminofénu v dávke 500 mg/kg bola myšiam podaná intraperitoneálne po dvoch dňoch, ktoré uplynuli od poslednej dávky PBS alebo PLA2. A hneď po 24 hodinách od podania injekcie acetaminofénu týmto myšiam boli udusené CO2. Na vykonanie ďalšej analýzy sa odobrali vzorky pečene, sleziny a krvi.
Analýza
Aby sa určil akýkoľvek druh zmien v populácii Tregs, po ošetrení PLA2 sa z myší Foxp3EGFP odstránili splenocyty. Bunky boli ošetrené PLA2 (0,01 ug/ml, 0,0 ug/ml 1, 1 ug/ml a 10 ug/ml) a potom kultivované v médiu RPMI 1640 pozostávajúcom z 2 ug/ml anti-myšej CD28 protilátky a 2,5 ug/ml anti- myši CD3 protilátku po dobu 72 hodín. Získané bunky sa inkubovali s fluorescenčne značenými Ab na farbenie CD25 a CD4. Údaje sa analyzovali pomocou Cell Quest Pro a údaje FACS sa získali pomocou prietokového cytometra FACS.
Hodnotenie
Po podaní injekcie acetaminofénu myšiam sa vzorky krvi získali hneď po uplynutí 0 hodín, 6 hodín a 24 hodín. Tieto vzorky by pomohli pri meraní dysfunkcie pečene prostredníctvom kvantifikácie ALT a AST. Všetky vzorky krvi sa skladovali pri teplote miestnosti jednu hodinu a neskôr sa centrifugovali iba 10 minút pri 1000 g, aby sa zabezpečilo správne oddelenie séra. Hladiny ALT a AST sa merali pomocou prístroja Fuji Dri Chem 3500i získaného z Japonska, zatiaľ čo hladina IL-10 v sére sa merala pomocou ELISA, USA.
Farbenie
Oddelené pečene sa umiestnili do 4 % PFA na 24 hodín a potom sa zaliali do parafínu. Vzorky parafínu sa narezali na plátky s hrúbkou 5 um a podrobili sa deparafinizácii. Tieto vzorky sa potom farbili v hematoxylíne na 90. roky a potom sa trikrát ponorili do eozínu. Po tomto procese boli vzorky pečene umiestnené pod tečúcou vodou na 10 minút a nakoniec zakryté sklom. Periportálne a portálne oblasti pečene sa hodnotili mikroskopicky.
Injekčné podávanie
Anti-myšia CD25 potkania IgG1 protilátka bola vytvorená z hybridómov získaných z ATCC, USA. Na depléciu Tregs sa intraperitoneálne podával anti-myší CD25 v dávke 0,1 mg na myš. Toto bolo podané pred injekciami acetaminofénu a PLA2. Podľa analýzy prietokovou cytometriou sa zistilo, že po použití FITC-anti-myšie CD4 protilátky PE-anti-myšie CD25 dochádza k deplécii Tregs.
Hodnotenie
Oddelené pečene sa skladovali pri -70 stupňoch Celzia, aby sa preskúmal zápal v pečeňových tkanivách po injekcii acetaminofénu. Zmrazené pečeňové tkanivá prešli homogenizáciou v proteínovom roztoku získanom od Intron Biotechnology, Kórea. A potom boli inkubované tridsať minút na ľade a nakoniec centrifugované pri 13 000 otáčkach za minútu pri 4 stupňoch Celzia počas 10 minút. IL-6 a TNF prítomné v pečeni sa merali pomocou enzýmového testu získaného od BD Biosciences, USA. Na meranie hladín dusitanov sa vzorky pečene inkubovali s rovnakým množstvom Griessovho činidla (1 % sulfanilamid/0,1 % N-(1-naftyl)-etyléndiamíndihydrochlorid/2,5 % H3P04) počas 10 minút pri teplote miestnosti. Koncentrácia proteínu sa merala pomocou súpravy BCAth Protein Assay Kit získanej od Thermo Scientific, USA. Konečné koncentrácie boli hodnotené s celkovým množstvom proteínu a neskôr vyjadrené vo forme pmol/mg alebo pg/mg.
Výsledky
Aby sa preskúmal imunomodulačný vplyv PLA2 v splenocytoch, boli liečené PBS alebo PLA2 počas 3 dní. Populácia Treg bola zvýšená spôsobom závislým od dávky v skupine liečenej PLA2 spojenej so skupinou liečenou PBS.
Ochranný účinok Po predbežnom ošetrení PLA2 sa myšiam podala veľmi vysoká dávka acetaminofénu 200 mg/kg. Vzorky krvi sa odobrali po 0 hodinách, 6 hodinách a 24 hodinách na meranie hladín ALT a AST. Na farbenie H a E sa pečeňové tkanivá vyrezali 24 hodín po podaní injekcie acetaminofénu. Hepatálna smrť buniek v periportálnej oblasti bola riadená pomocou injekcie PLA2. ALT a AST sa zvýšili po podaní acetaminofénu, zatiaľ čo injekcia PLA2 potlačila zaznamenané zvýšenie hladín ALT a AST.
Hepatoprotektívny účinok
Účinky PLA2 v modeli zmenšenia CD4+CD25+T buniek sa skúmali s anti-CD25 protilátkou podávanou v množstve 0,1 mg/myš intraperitoneálnou injekciou. Tiež sa merali hladiny ALT a AST v sére. Zistilo sa, že terapia PLA2 neovplyvnila histopatológiu pečene, hladiny ALT a AST u myší s depléciou Treg nevykazovali žiadne zmeny. Hepatoprotektívny účinok PLA2 bol znížený u myší s depléciou Treg. Vo svetle týchto výsledkov možno povedať, že v dôsledku vyčerpania Treg boli hepatotoxické účinky PLA2 eliminované a zistilo sa, že hepatoprotektívny účinok PLA2 je závislý od Treg.
Cytokíny v pečeni
Na skúmanie protizápalového účinku terapie PLA2 pri poranení vyvolanom acetaminofénom sa vypočítali hladiny NO, IL-6 a TNF v pečeni po 24 hodinách od podania injekcie acetaminofénu. Pozorovalo sa, že liečené myši vykazovali zvýšenie hladín NO, IL-6 a TNF. Na druhej strane subjekty liečené PLA2 vykazovali pôsobivý pokles hladín NO, IL-6 a TNF ako kontrolná skupina a deplécia Tregs znížila schopnosť obranného správania PLA2.
Produkcia IL-10 priniesla účinky PLA2
Je dobre známym javom, že IL-10 ponúka ochranu pred poškodením pečene vyvolaným acetaminofénom. Bolo však dôležité určiť, či sú hepatoprotektívne účinky PLA2 závislé od IL-10 alebo nie. Na tento účel sa vybrali myši s deficitom IL-10. Hladiny ALT a AST sa merali 24 hodín po podaní injekcie acetaminofénu. Získané výsledky ukázali, že účinok PLA2 na hepatotoxicitu indukovanú acetaminofénom bol u myší s deficitom IL-10 zrušený. To naznačuje, že IL-10 hrá dôležitú úlohu pri sprostredkovaní ochranných účinkov PLA2 v stave hepatotoxicity.
Okrem toho tieto klinické zistenia tiež naznačujú, že Tregs sú veľmi dôležité pre primárne zvýšenie a produkciu IL-10 u myší. IL-10 tiež ponúka ochranu pred acetaminofénom vyvolanou letalitou pečene a poškodením. Louis a spol. ukázali, že správne podávanie IL-10 odstraňuje akékoľvek šance na hepatotoxicitu v lipopolysacharidovom a galaktozamínovom myšacom modeli.
Diskusia
Musíte vedieť, že pečeň je jedným zo životne dôležitých orgánov, ktoré pomáhajú pri detoxikácii rôznych toxínov a liekov z nášho systému. Toxíny a lieky môžu vo veľkej miere poškodiť pečeň. Stáva sa to postupne, ale trvá veľa času, kým sa objavia príznaky. Preto bolo v tomto klinickom experimente zaznamenané, že vysoká dávka acetaminofénu – analgetika – vedie u experimentálnych myší k akútnej hepatotoxicite.
Podľa klinickej štúdie vykonanej skôr sa dospelo k záveru, že Tregs pomáhal pri zmierňovaní zápalu spôsobeného poškodením pečene. Adoptívna indukcia Tregs u myší úspešne zabraňuje akémukoľvek druhu poškodenia pečene. V tomto výskume bolo prezentované, že PLA2 kompenzuje zápalové imunitné ochorenie pomocou regulácie Treg. PLA2 odvodená z včelieho jedu pôsobivo posilnila populáciu Treg v splenocytoch. Z týchto výsledkov sa stanovila hypotéza, že PLA2 môže poskytnúť ochranný účinok na hepatotoxicitu vyvolanú acetaminofénom s doplnkovým účinkom Tregs.
Je možné navrhnúť, že PLA2 možno použiť ako alternatívnu terapiu pre NAC alebo dokonca použiť súčasne s NAC na zmiernenie zápalu spôsobeného poškodením pečene acetaminofénom.
Záver
Na záver možno povedať, že PLA2 podporuje sekréciu IL-10 moduláciou Treg a zabraňuje akútnemu poškodeniu pečene. Veľmi sa predpokladá, že PLA2 si zachováva hepatoprotektívny účinok pri toxicite vyvolanej acetaminofénom prostredníctvom modulácie IL-10 a Tregs u experimentálnych myší.
Zdroj: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4257707/