Čo je rakovina prsníka?
Ide o typ rakoviny, ktorý vzniká v prsníku nekontrolovaným rastom škodlivých buniek. Na začiatku je prítomný malý nádor, ktorý sa dá zistiť fyzicky, vo forme hrčky alebo sa dá diagnostikovať pomocou röntgenu.
Ale nie všetky hrčky v prsníku sú náchylné na rakovinu, pretože väčšina z nich je benígna. Nerakovinový nádor je len abnormálny rast, ktorý sa neprejavuje mimo prsníka a rozhodne nie je vôbec život ohrozujúci. Dôrazne sa odporúča zistiť a skontrolovať akýkoľvek druh zmien alebo hrčiek pozorovaných v prsníku profesionálnym odborníkom na zdravotnú starostlivosť, aby ste určili, či sú malígne alebo benígne a aké sú s tým spojené riziká.
Ako to začína a aké sú jej typy?
Rakovina prsníka môže začať v ktorejkoľvek časti prsníka. Možné oblasti jeho pôvodu sú:
– V kanáloch, ktoré dodávajú mlieko do bradavky. Tento typ rakoviny je známy ako rakovina potrubia.
– V žľazách, ktoré produkujú mlieko. Tento typ rakoviny je známy ako lobulárna rakovina.
– V tkanivách prsníkov. Sú známe ako lymfómy a sarkómy.
– Menej bežné typy rakoviny prsníka, ako je angiosarkóm a nádor phyllodes.
Rakovinu prsníka možno odhaliť aj mamografickým skríningom. Včasná diagnostika môže pomôcť začať správnu terapiu skôr, ako rakovinové bunky môžu spôsobiť katastrofu.
Ako sa lieči rakovina prsníka?Liečba rakoviny prsníka pomáha ničiť bunky zodpovedné za rakovinu nachádzajúce sa v blízkych tkanivách a prsníku. Rôzne možnosti liečby sú:
Chirurgia
Je to možno najbežnejšia liečba, známa ako mastektómia, prostredníctvom ktorej sa odstráni celý prsník. V inom procese sú tkanivá a nádory odstránené a je známy ako lumpektómia.
Chemoterapia
Používa rôzne lieky na odstránenie rakovinových buniek a predpísané účinné lieky môžu viesť k únave, návalom horúčavy, skorej menopauze, vypadávaniu vlasov a nevoľnosti na dlhú dobu.
Hormonálna terapia
Pri tomto type liečby sa používajú rôzne lieky na kontrolu hormónov, ktoré sú zodpovedné za napomáhanie rastu buniek zodpovedných za rakovinu. Vaječníky sa tiež liečia liekmi alebo chirurgickým zákrokom, aby sa im zabránilo produkovať hormóny. Vedľajšie účinky týchto liekov môžu viesť k vaginálnej suchosti a návalom horúčavy.
Cielená terapia
Pri tomto type liečby sa prirodzený imunitný systém posilňuje natoľko, že dokáže sám ničiť rakovinové bunky. Používané lieky sú špecificky zamerané na rakovinové bunky prítomné v prsníku.
Subjekt trpiaci rakovinou prsníka môže dostať kombináciu rôznych liečebných postupov súčasne s hormonálnou terapiou, chemoterapiou, ožarovaním a dokonca chirurgickým zákrokom. Na úplné odstránenie rakovinových buniek sa odporúča komplexný režim.
Tu je dôležité spomenúť, že všetky vyššie uvedené liečby majú závažné vedľajšie účinky, ktoré môžu ovplyvniť aj iné orgány tela. Zdravotníci preto hľadajú bezpečné možnosti liečby, ktoré nenarušia ostatné funkcie organizmu. V tomto prípade je včelí jed jednou z najvhodnejších možností liečby rakovinových buniek bez poškodenia zdravých buniek.
Protirakovinový účinok včelieho jedu na ľudské bunky rakoviny prsníka MDA-MB-231 pomocou Ramanovej spektroskopie
Konspekt
V tejto klinickej štúdii sa skúmal apoptotický účinok BV (včelí jed) na ľudské bunky rakoviny prsníka prostredníctvom analýzy hlavných zložiek (PCA) a Ramanovej spektroskopie. Akýkoľvek druh biochemických zmien v rakovinových bunkách bol hodnotený po liečbe včelím jedom. Zistilo sa, že sa získali rôzne výsledky pre rôzne trvanie liečby a koncentrácie.
V rakovinových bunkách, ktoré boli ošetrené včelím jedom s dávkou 3,0 ug/ml počas 48 hodín, sa v porovnaní s kontrolnými bunkami zaznamenal významný pokles Ramanových vibrácií proteínov a DNA.
Toto zistenie vysoko naznačuje, že dochádza k degradácii a denaturácii fragmentácie DNA a proteínov. Výsledky Ramanovej spektroskopie boli testom Western blot a TUNEL. Ramanova spektroskopia spolu s PCA teda vedie k neinvazívnemu nástroju na hodnotenie bunkových zmien prostredníctvom protirakovinových vlastností včelieho jedu.
Úvod
Na dosiahnutie účinnej a bezpečnej liečby rakoviny je dôležité pochopiť interakciu rôznych protirakovinových mediátorov s postihnutými bunkami. Je tiež dobre známe, že protirakovinová terapia vedie k apoptóze cieľových rakovinových buniek. Všeobecná apoptóza je definovaná prostredníctvom bunkových morfologických zmien, ako je mitochondriálna dysfunkcia, aktivácia kaspázy, štiepenie DNA, pľuzgiere a zmršťovanie.
Western blot a MTT merajú syntézu proteínov a enzymatickú aktivitu, pretože koncové body sú spojené s životaschopnosťou buniek. Tieto testy sú prácne, časovo náročné, deštruktívne, komplikované a invazívne. Vyžadujú tiež veľké množstvo materiálu na získanie len malého množstva konečného produktu. Okrem toho molekulárny mechanizmus týchto interakcií nie je možné hodnotiť prostredníctvom týchto testov, pretože fluorescenčné značky používané počas merania môžu viesť k zmenám v biologických podmienkach. Na monitorovanie živých buniek v reálnom čase je teda potrebná neinvazívna analytická technika bez označenia.
Technika použitá v tejto klinickej štúdii – Ramanova spektroskopia – je rýchla a neinvazívna technika, ktorá dokonca nevyžaduje žiadne odbery vzoriek pred vykonaním analýzy. Poskytuje tiež podrobné kvantitatívne informácie o chemickom zložení, molekulárnej štruktúre a interakcii v bunkách prostredníctvom vysokej selektivity a citlivosti. Ramanova spektroskopia sa použila v rôznych klinických štúdiách na stanovenie: účinkov aktinomycínu D na líniu rakoviny pľúc a na meranie molekulárnych zmien (časovo závislých) v pridružených bunkách počas apoptózy. Ale v tejto klinickej štúdii sa Ramanova spektroskopia používa po prvýkrát na určenie protirakovinového účinku včelieho jedu na bunky rakoviny prsníka.
Metóda
Ľudské bunky rakoviny prsníka boli získané z American Type Culture Collection, USA. Bunky boli kultivované v Dulbeccovom vylepšenom Eagle médiu, ktoré bolo doplnené antibiotikami a 10% FBS (fetálne bovinné sérum), vo vlhkej atmosfére s 95% vzduchu a 5% CO2. PBML (mononukleárne lymfocyty ľudskej periférnej krvi) boli neskôr izolované z krvi získanej od darcov pomocou gradientovej centrifugácie Ficoll-hypaque.
Získané PBML boli rozdelené do 2 rôznych značiek: horný pás mal PBMC, zatiaľ čo spodný pás mal neutrofily. PBML sa najskôr zozbierali a potom sa trikrát premyli v PBS. Bunky boli vystavené včeliemu jedu so zložením: 50 % melittín, 2,5 % apamín, 2 % MCD peptid, 2 % amín, 1,5 % hyaluronidáza, 0,5 % histidín, 1 % lyso-PLA, 12 % PLA a 10 % až 17 % norepinefrínu, dopamínu, kyslej fosfomonoesterázy, invertázy, glukozidázy a inhibítora proteázy – tieto zložky boli takmer 100% čisté a boli inkubované po dobu 24 hodín.
Bunky boli nasadené na 96-jamkové platne a neskôr ošetrené rôznymi dávkami včelieho jedu a fyziologického roztoku počas rôznych období. Po ukončení liečby sa bunková životaschopnosť skúmala pomocou súpravy Cell Counting Kit-8. Systém detekcie apoptózy bol použitý podľa pokynov dodávateľa. Ošetrené bunky sa dvakrát premyli PBC a potom sa na 20 minút pridal aj 1 % paraformaldehyd (ľadovo studený). Bunky sa inkubovali jednu hodinu pri 37 stupňoch Celzia v tmavom prostredí v 50 ul tlmivého roztoku pozostávajúceho z fluoresceínu-12-dUTP, ktorý má tiež koncovú deoxynukleotidyltransferázu na označenie 3′-OH koncov fragmentovanej DNA.
Po tejto reakcii boli bunky opäť premyté roztokom PBS a zafarbené zmesou 250 ug RNázy a 5,0 ug/ml BSA. Povrchová expozícia fosfatidylserínu apoptotickými bunkami bola hodnotená prietokovým cytometrom po pridaní anexínu V-V-FITC a súčasne zafarbená PI. Získané vzorky sa skúmali na prietokovom cytometri FACSort pomocou softvéru Lysis II.
Na uskutočnenie Ramanovho spektroskopického merania sa použil substrát potiahnutý zlatom. Bola pridaná vrstva Cr, aby mohla byť správna adhézia medzi skleneným substrátom a zlatým filmom. Z každej skupiny sa odobralo 10 individuálnych buniek. Ramanove spektrá boli získané pomocou konfokálneho Ramanovho systému SENTERRA vybaveného diódovým laserovým zdrojom (785 nm a 100 mW) s rozlíšením 3 cm. Ramanove signály sa zbierali cez 100x MPLN N.A 0,9 Olympus, ktorý generuje laserový bod 1 um.
Predspracovanie údajov a získavanie Ramanovho spektra bolo riadené softvérom OPUS. Na extrakciu čistej vzorky Ramanových spektier sa na namerané údaje aplikoval automatizovaný algoritmus na odstránenie autofluorescenčného pozadia. Ramanove merania boli zaznamenané v akumulačnom čase 60 sekúnd v rozsahu 600 cm-1 až 1750 cm-1. Ramanove spektrá vybraných buniek sa vypočítali ako priemer z desiatich vzoriek.
Výsledky
Na stanovenie cytotoxických účinkov včelieho jedu na ľudské normálne bunky a bunky rakoviny prsníka sa stanovila životaschopnosť buniek pomocou testu CCK-8. Zistilo sa, že BV významne bráni proliferácii rakovinových buniek. Na ďalšie rozlíšenie medzi náchylnosťou normálnych buniek a rakovinových buniek sa skúmali účinky včelieho jedu v PBML. Výsledkom bolo, že BV nevykazoval žiadny druh cytotoxického účinku na PBLM v dávke 12,4 ug/ml po 72 hodinách inkubácie.
Zatiaľ čo výsledky získané prostredníctvom Ramanovej spektroskopie v kombinácii s PCA preukázali zhodu s výsledkami získanými prostredníctvom konvenčných biologických testov, ako sú testy western blot, TUNEL a životaschopnosť. Táto technika je najlepšia na určenie apoptotických účinkov včelieho jedu prostredníctvom neinvazívneho hodnotenia kvality bunkových zmien bez označenia.
Výsledky získané z Ramanovej spektroskopie v kombinácii s PCA ukázali dobrú zhodu s výsledkami získanými použitím konvenčných biologických testov, ako sú testy životaschopnosti, TUNEL a western blot, ako je opísané v predchádzajúcej časti. Táto technika sa teda môže použiť na hodnotenie apoptotického účinku BV pomocou neinvazívneho hodnotenia kvality bunkových zmien bez označenia.
Zdroj: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6238932/
Synergické účinky vyvolané kombinovanou liečbou vodného extraktu propolisu a jedu
Konspekt
Rakovinu prsníka možno považovať za heterogénne ochorenie, ktoré vedie k veľkému počtu úmrtí. TNBC (triple-negatívna rakovina prsníka) je jednou z najťažších rakovín, ktoré vznikajú v dôsledku úplného zlyhania chemoterapie. Preto je kľúčové vyvinúť alternatívnu terapiu, ktorá by mohla kontrolovať TNBC. V tejto klinickej štúdii boli starostlivo hodnotené synergické účinky včelieho jedu a propolisu na bunkové línie TNBC a MCF-7.
Vyššie uvedené, bunkové línie rakoviny prsníka boli kultivované v médiu MEM a DMEM a doplnené fetálnym hovädzím sérom 10 %, penicilín-streptomycínom a 1 % glutamínom pri teplote 37 stupňov Celzia v 5 % C02 inkubátore. 0,01 mg/ml inzulínu sa pridalo do média ľudských buniek rakoviny prsníka, zatiaľ čo 1 % NEEA (neesenciálna aminokyselina) sa pridalo do média MCF-7.
Včelí jed použitý v tejto klinickej štúdii bol získaný elektrostimulačným procesom, zatiaľ čo 30% extrakt z propolisu a včelieho jedu bolo získaných z Bisboaca Simona Elena a Dostean Cornelia. Ošetrenie propolisom sa uskutočnilo nasledovne: vodný roztok sa podrobil centrifugácii pri 5000 x g počas 10 minút, aby sa zbavil akéhokoľvek druhu sedimentu. Neskôr sa supernatant ďalej filtroval, aby sa odstránili všetky kontaminanty. Včelí jed bol suspendovaný vo vode bez DNAázy/RNázy. Včelí jed a propolis sa ďalej riedili pomocou vody bez DNAázy/RNAázy na sériovú koncentráciu v pomeroch 0,1:100 až 30:50.
Synergický účinok vyvolaný včelím jedom a propolisom sa hodnotil pomocou kombinovanej terapie založenej na každej liečbe uskutočnenej podľa IC50 pre dve rakovinové bunkové línie. Následné sériové riedenie sa tiež uskutočnilo podobne. Uskutočnil sa MTT test na posúdenie protirakovinovej aktivity podporovanej dvomi uskutočnenými liečbami. Z tohto dôvodu sa 2×104 buniek nanieslo na 96-jamkové platne s 200 ul kultivačného média. Pred začatím liečby sa na platne s jamkami pridalo aj 200 ul čerstvého média obsahujúceho vyššie opísané stúpajúce koncentrácie včelieho jedu alebo propolisu alebo ich kombinácie. Inkubácia sa uskutočnila počas 24 hodín a potom sa médium odstránilo a nakoniec sa na doštičky s jamkami na 1 hodinu pridalo 100 ul MTT.
Výsledok
Zistené výsledky ukázali, že obe bunkové línie preukázali podobnú úroveň citlivosti na propolis pri zriedenom roztoku 0,072 mg/ml až 0,09 mg/ml. IC50 pre BV na bunkách MCF10 bola 1 mg/ml, čo bolo 20-krát viac ako 0,05 mg/ml v ľudských bunkách rakoviny prsníka. Po skombinovaní včelieho jedu s propolisom bol pozorovaný synergický účinok pri vyššej koncentrácii, takmer 5- a 2-krát silnejšej ako pri dvoch ošetreniach samostatne.
Zdroj: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4777451/
Záver
Obe vyššie diskutované klinické štúdie jasne naznačujú, že včelí jed samotný a v kombinácii môže pomôcť kontrolovať aktivitu ľudských buniek rakoviny prsníka. Dôležité je určiť dokonalú dávku na liečbu subjektov s rakovinou prsníka bez akýchkoľvek vedľajších účinkov.