Čo je Parvovírus B19?
Nazýva sa tiež B19V, čo je jednovláknový vírus patriaci do čeľade Parvoviridae. Typ B19 postihuje iba ľudí a príznaky sa líšia podľa celkového zdravia a veku. Zistilo sa, že 2 z 10 ľudí sú infikovaní týmto vírusom a nie je ani potrebné, aby mali nejaké zjavné príznaky.
Aké sú príznaky parvovírusu?
– Najčastejšie vedie k piatej chorobe – miernym vyrážkam (pozorované väčšinou u detí). Bežné príznaky tohto vírusu sú:
– Ťažká anémia
– Opuchnuté alebo bolestivé kĺby
– Sčervenanie kože
Ako sa prenáša?
Zvyčajne sa šíri cez respiračné sekréty infikovanej osoby, ako je nosový hlien, spútum a sliny. Môže sa šíriť aj prostredníctvom infikovaných krvných produktov.
Ako sa diagnostikuje?
Normálne sa od možného subjektu odoberie vzorka krvi, aby sa určilo, či bol vírus aktivovaný alebo nie.
Ako tomu možno zabrániť?
V súčasnosti nie je k dispozícii žiadny alopatický liek ani vakcína, ktorá by mohla pomôcť zabrániť tomuto vírusu. Pravdepodobnosť, že budete postihnutí parvovírusom B19 alebo zasiahnutí iných, však možno obmedziť pomocou nasledujúcich opatrení:
– Úplné zakrytie nosa a úst pri kýchaní alebo kašľaní
– Dôkladne si umyte ruky dezinfekčným mydlom a vodou
– Odpočinok a pobyt doma počas choroby
– Vyhýbanie sa úzkemu kontaktu s tými, ktorí trpia týmto vírusom
Teraz sa pozrime na Bocavirus.
Čo je Bocavirus?
Nazýva sa tiež ľudský bocavírus alebo HBoV, čo je neobalený a jednovláknový vírus patriaci do čeľade Parvoviridae. Ide o novoobjavený vírus, ktorý postihuje väčšinou deti. HBoV sa tiež nazýva „objavujúci sa vírusový patogén“ z dôvodu, že sa spája s inými infekciami. Musí sa ešte dokázať, že ak sa tento vírus prejavuje sám o sebe alebo je spôsobený inými vírusmi, alebo existuje paralelne s inými vírusmi.
Aké sú príznaky bocavírusu?
Nasledujú príznaky a symptómy spojené s Bocavírusom.
-Vysoká horúčka
-Pretrvávajúci kašeľ
-Akútna infekcia dýchacích ciest
-Rinorea
-Cyanóza
-Zvracanie
-Hnačka
Deti s týmito príznakmi môžu veľmi ochorieť a často vyžadujú hospitalizáciu.
Ako sa prenáša?
Podľa vedeckých zistení možno konštatovať, že bokavírus sa šíri prevažne sekrétmi dýchacích ciest. Stopy tohto vírusu možno zistiť zo vzoriek krvi a stolice. Najčastejšie sa vyskytuje u malých detí, ktoré často zostávajú choré.
Ako sa diagnostikuje?
Normálne sa od možného subjektu odoberá vzorka krvi, aby sa zistilo, či bol vírus aktivovaný alebo nie.
Ako tomu možno zabrániť?
Kmene bocavírusu nie sú výlučne zodpovedné za symptómy uvedené vyššie. A v súčasnosti nie je k dispozícii žiadna vakcína, ktorá by pomohla pri kontrole tohto vírusu. Odporúča sa všeobecná hygiena a ochrana, aby sa zabránilo šíreniu a prenosu tohto vírusu.
Ako možno liečiť parvovírus a bocavírus?
Bežné lieky, ktoré sa používajú na liečbu symptómov týchto vírusov, nie sú účinné alebo majú nejaký druh nežiaducich účinkov. Výskumníci v súčasnosti využívajú na liečbu parvovírusu a bocavírusu prírodné terapie, ako je jed včiel medonosných.
Účinky jedinečnej oblasti ľudského parvovírusu B19 a bocavírusu VP1 na tesné spojenie epiteliálnych buniek ľudských dýchacích ciest A549
Úvod
B19 a HBoV sú ľudské patogény. VP1u HBOV aj B19 vykazovali enzymatickú aktivitu podobnú aktivite sPLA2 a zistilo sa, že sa podieľa na patogenéze ochorenia dolných dýchacích ciest. Nebolo však riešené, ako VP1u z HBoV a B19 ovplyvňuje tesné spojenie.
Táto klinická štúdia je založená na myšlienke určiť, ako VP1u z HBoV a B19 infikuje tesné spojenie epitelových buniek dýchacích ciest A549. Tento proces bol stanovený skúmaním účinnosti imunoblotovacej analýzy, transepiteliálnej elektrickej rezistencie a aktivity fosfolipázy A2.
Klinické výsledky ukazujú, že transepiteliálny elektrický odpor je znížený v bunkách A549 prostredníctvom liečby TNF-alfa (10 ng), 2 dávkami HBoV-VP1u a B19-VP1u (4000 ng a 400 ng) a včelím jedom (10 ng) kontrolná skupina.
Zvýšenie caludínu-1 a zníženie okludínu sa zistilo v bunkách A549 po ich ošetrení TNF alfa alebo kombinovanými dávkami HBoV-VP1u ako v kontrolnej skupine. Okrem toho sa v bunkách A549 pozoroval významný pokles NA+/K+ ATPázy po ich ošetrení TNF-alfa a vysokou dávkou B19-VP1u v kombinácii s oboma dávkami HBoV-VP1u ako v kontrolnej skupine.
Tieto zistenia ukazujú, že nie B19 VP1u, ale HBoV VP1u hrá dôležitú úlohu pri narušení tesného spojenia prítomného v dýchacích cestách.
Úvod
Epitel prítomný v dýchacom systéme spolu s inými orgánmi pôsobí ako bariéra medzi prvkami vonkajšieho prostredia a tkanivami pod nimi. Epitelové bunky sa polarizujú po vytvorení špecifických bunkových spojení, sú známe ako komplexy apikálnych spojení ako TJs (tesné spojenia) a AJs (adherentné spojenia). Tesné spojenia sú veľmi tesné spojenia bunka-bunka, ktoré vedú k párovým vláknam, ktoré utesňujú prázdne medzery medzi rôznymi susednými bunkami a pomáhajú kontrolovať interaktívnu permeabilitu malých molekúl.
Tesné spojenia tiež pôsobia ako bariéra proti potenciálnym patogénom a rôznym cudzorodým časticiam, čo pomáha predchádzať poraneniu tkaniva a infekcii. TJ sú tvorené proteínovým komplexom, ktorý obsahuje ZO (zona ocludens), okluzívne a tetraspanínové klaudíny. Kvôli svojej dôležitej úlohe je epitel prítomný v dýchacom trakte vysoko citlivý na rôzne molekuly s proteolytickou aktivitou, ako je sPLA2. Táto klinická štúdia s využitím buniek A549, celkom známych vo Vitro modeli tesných spojení, skúma, ako HBoV-VP1u a B19-VP1u ovplyvňujú moduly tesných spojení.
Metóda
381-bp fragment DNA vrátane nukleotidov 3056-3442 kmeňa HBoV, získaný z Center for Disease Control, Taiwan, bol rozšírený pomocou polymerizovanej reťazovej reakcie. Priméry použité v tejto reakcii boli 5′-GCGTCGACTGAGGTTCCTG G-3′ (reverzný) a 5′-GCGAATTCATGCCTCCAATTAAG-3′ (dopredný). Boli podrobené EcoRI miestu na 5′ konci a Sal I miestu na 3′ konci, aby boli klonované do pET-32a.
Proteíny HBoV-VP1u a B19-VP1u boli zvažované pre aktivitu sPLA2 pomocou kolorimetrickej testovacej súpravy získanej od Cayman Chemical. Tento proces sa uskutočnil podľa pokynov výrobcu prostredníctvom dynamických kolorimetrických meraní (optická hustota sa udržiavala na 414 mm) vykonávaných každých 10 minút. Získané výsledky sa interpretujú ako mikromóly za minútu na mililiter.
Epitelové bunky (A549) boli získané z ATCC (zbierka kultúr amerického typu) a boli vyvinuté v DMEM (Dulbecco’s Modified Eagle Medium) a boli doplnené 10% (FBS) fetálnym hovädzím sérom pri 37 stupňoch Celzia a 5% inkubátore s oxidom uhličitým. . Na uskutočnenie klinického experimentu boli epitelové bunky naočkované a plne pestované v miskách (100 cm2). Uskutočnil sa účinok HBoV-VP1u a B19-VP1u v rôznych dávkach na TJ epitelových buniek.
Aby sa preskúmala integrita epitelovej bariéry, epitelové bunky boli najprv nanesené na platne a potom kultivované po dobu 48 hodín a potom vystavené TNF-alfa (10 ng/ml), včeliemu jedu PLA2 v troch rôznych dávkach (4000 ng/ml, 400 ng/ml a 1 ug/ml) rekombinantných proteínov HBoV-VP1u alebo B19-VP1u počas 1 dňa. Na uskutočnenie klinickej štúdie sa epitelové bunky naočkovali vo veľmi vysokej hustote na vložky Snapwell z Costar, USA a udržiavali sa pri 37 stupňoch Celzia v atmosfére 5 % oxidu uhličitého a 95 % vzduchu. Hodnoty TEER sa získali po odčítaní odporu slepého filtra od každého odčítania.
Kultivované bunky sa zhromaždili pomocou centrifugácie pri 800 g počas 5 minút a potom sa dvakrát premyli mraziacim PBS. Zozbierané bunky sa opäť suspendovali v 600 ul PRO-PREP pufra získaného od iNtRON Biotech, Kórea a nechali sa hodinu na ľade. Tieto vzorky sa potom opäť centrifugovali pri 13 000 ot./min. počas piatich minút pri 4 stupňoch Celzia. Supernatant označený ako surový extrakt sa premiestnil do čerstvého Eppendorfa a udržiaval sa pri teplote mínus 20 stupňov Celzia. Koncentrácia proteínu v získaných vzorkách sa analyzovala Bradfordovým testom s pomocou japonského spektrofotometra pri 595 nm a BSA sa udržiaval ako štandard.
Vzorky proteínov sa rozdelili na 10 % alebo 12,5 % SDS PAGE a potom sa elektroforeticky presunuli na nitrocelulózovú membránu získanú od Amersham Biosciences, USA. Štatistické analýzy boli riadené pomocou softvéru GraphPad Prism 5 prostredníctvom jednosmernej analýzy rozptylu, po ktorej nasledoval Tukeyov viacnásobný porovnávací test. Získané údaje boli overené trikrát prostredníctvom nezávislých experimentov.
Výsledok
HBoV-VP1u aj B19-VP1u hrajú dôležitú úlohu v patogenéze a infekčnosti rôznych chorôb vďaka ich aktivitám PLA2. Táto štúdia bola vykonaná s cieľom potvrdiť, že proteíny HBoV-VP1u a B19-VP1u preukázali aktivitu PLA2 čistením a konštrukciou rekombinantných proteínov HBoV-VP1u a B19-VP1u.
Pri pozitívnej kontrole vykazoval PLA2 z včelieho jedu aktivitu PLA2 s hodnotou 0,235 umol/min/ml, zatiaľ čo v TNF-alfa nebola zaznamenaná žiadna enzymatická aktivita PLA2. Významná aktivita bvPLA2 bola pozorovaná v proteínoch HBoV-VP1u a B19-VP1u pri 0,065 umol/min/ml a 0,035 umol/min/ml. A významnejšie zvýšenie aktivity sPLA2 bolo detegované vo vysokej dávke proteínov HBoV-VP1u a B19-VP1u s aktivitou 1,362 umol/min/ml a 0,765 umol/min/ml, v danom poradí.
Účinky HBoV-VP1u a B19-VP1u na TJ v epitelových bunkách sa ďalej skúmali analýzou claudínu-1 a okludínu – dvoch kľúčových indikátorov TJ prostredníctvom imunoblotovacej analýzy. Získané výsledky ukázali, že kaludin-1 sa zvýšil v epitelových bunkách po ich ošetrení TNF-alfa a oboma dávkami HBoV-VP1u v porovnaní s kontrolou. Na druhej strane, claudín-1 nevykazoval žiadnu variáciu v epiteliálnych bunkách po ošetrení BVPLA2 a oboma dávkami B10-VP1u. Podobné výsledky boli zaznamenané pri expresii okludínu. Hladina proteínu okludínu v epitelových bunkách bola ďalej znížená, keď boli podrobené liečbe TNF-alfa alebo HBoV-VP1u v porovnaní s kontrolou, zatiaľ čo v epitelových bunkách sa nepozorovali žiadne variácie po liečbe BVPLA2 alebo B19-VP1u. .
Expresia Na+/K+ ATPázy má úzky vzťah s polaritou a bunkovým tesným spojením epitelových buniek. Táto klinická štúdia teda skúmala expresiu Na+/K+ ATPázy v epitelových bunkách po ošetrení rekombinantnými proteínmi B19-VP1u a HBoV-VP1u prostredníctvom imunoblotovacej analýzy. Významné zníženie expresie Na+/K+ ATPázy v epitelových bunkách bolo zistené po ošetrení TNF-alfa, oboma dávkami HBoV-VP1u a 4000 ug/ml B19-VP1u. Na druhej strane expresia Na+/K+ ATPázy v epitelových bunkách nezaznamenala značnú zmenu po ošetrení BVPLA2 a 400 ug/ml B19-VP1u v porovnaní s hodnotou kontrol.
Diskusia
sPLA2 pozostáva z komplexnej rodiny rôznych enzýmov, ktoré sú rozšírené po celej epiderme. Zistilo sa, že tieto enzýmy pomáhajú hydrolyzovať glycerofosfolipidovú esterovú väzbu v polohe sn-2 za vzniku lyzofosfolipidu a voľnej mastnej kyseliny. Mechanizmus sPLA2 sa podieľa na rôznych dôležitých epidermálnych procesoch. A najdôkladnejšie preskúmaný účinok sPLA2 je jeho úloha pri zápale. Je potrebné poznamenať, že v pľúcnych tkanivách existujú rôzne typy sPLA2, ktoré poskytujú množstvo eikosanoidov, ktoré vedú k pľúcnemu edému.
Podľa výsledkov tejto klinickej štúdie včelí jed PLA2 s oboma dávkami HBoV-VP1u a B19-VP1u preukázal enzymatický účinok sPLA2 a znížil transepiteliálny elektrický odpor, čo naznačuje, že existuje zvýšená permeabilita TJ v epitelových bunkách. Hoci vysoká dávka B19-VP1u by mohla pomôcť znížiť expresiu Na+/K+ ATPázy, iba HBoV-VP1u a TNF-alfa zvýšili expresiu accludinu-1 a znížili expresiu okludinu a Na+/K+ ATPázy. Podľa týchto zistení možno konštatovať, že HBoV-VP1u namiesto B19-VP1u ovplyvnilo narušenie TJs v epitelových bunkách a tento proces nie je spojený s enzymatickými aktivitami sPLA2.
Záver
Ako vieme, HBoV a B19 úzko súvisia s poranením a infekciou spôsobenou v dýchacom trakte, ale patogénny mechanizmus týchto vírusov zostáva neznámy. Klinická štúdia, o ktorej sa tu diskutuje, jasne preukázala, že HBoV-VP1u preukázal rušivý účinok na TJ v epiteliálnych bunkách, zatiaľ čo B19-VP1u vykazoval nízku schopnosť narušiť TJ. Podľa týchto zistení sa určite verí, že HBoV-VP1u a B19-VP1u majú rôzne úlohy pri liečbe respiračných infekcií. Preto je možné včelí jed použiť na liečbu parvovírusu a bocavírusu bez akýchkoľvek komplikácií.
Zdroj: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4182432/