Astma a jej prejav
Astma postihla veľkú populáciu, ktorá zahŕňa dospelých a deti. Toto ochorenie je bežnejšie vo vyspelom a industrializovanom svete. Bolo pozorované, že za posledných 50 rokov počet prípadov astmy výrazne vzrástol. Ak hovoríme o západe, možno povedať, že takmer 10 % bežnej populácie trpí astmou a medzi postihnutými je percento chlapcov vyššie ako dievčat.
Čo je astma?
Astma je typ chronického zápalu, ktorý sťahuje svaly prítomné okolo priedušnice a vedie k opuchu sliznice. Čo to znamená? Aby bolo jasné, astma obmedzuje normálny prietok vzduchu do pľúc, čo vedie k dýchavičnosti, sipotu a kašľu. Okrem toho má pacient s astmou problémy s dutinami a nosom spolu so zoštíhlením hrudníka. Toto sú základné príznaky astmy.
Aké sú možné spúšťače astmy?
V niekoľkých prípadoch astmy môžu byť tieto príznaky dosť závažné a ak sa s nimi nezaobchádza včas, môžu viesť k vážnym následkom. Ešte je potrebné určiť, čo spôsobuje astmu, ale všeobecne sa verí, že astmu môžu vyvolať niektoré chemikálie, zlé vnútorné prostredie, alergie a znečistenie ovzdušia. Niektorí ľudia majú aj dedičnú astmu. Stáva sa to, keď jeden alebo obaja rodičia majú príznaky astmy. V dôsledku toho je dosť pravdepodobné, že aj u ich dieťaťa sa niekedy objavia príznaky astmy.
Kto trpí astmou?
Astma môže postihnúť aj deti a dobrá vec je, že príznaky môžu časom vymiznúť. Existujú dva rôzne typy astmy: nealergická astma a alergická astma. Dospelí zvyčajne čelia príznakom nealergickej astmy, zatiaľ čo deti väčšinou trpia alergickou astmou.
Je tiež potrebné chápať, že alergická astma sa môže ľahko vyvinúť u tých pacientov, ktorí majú určitý druh precitlivenosti súvisiaci s roztočmi, zvieracou srsťou a peľom. Keď telo zažije niektorý z týchto spúšťačov, protilátky začnú pôsobiť, čo vedie k alergickej reakcii, ktorá sa nazýva astma.
Na druhej strane nealergickú astmu zvyčajne spúšťajú rôzne respiračné infekcie, fyzická námaha, výfukové plyny, tabakový dym, parfumy, drogy, studený vzduch, smog a prach.
Subjekt astmy musí posúdiť stav a použiť najnovšie a účinné prírodné liečby, ako je jed včiel medonosných, aby kontroloval symptómy. Akýkoľvek druh liečby trvá nejaký čas, kým prinesie svoje účinky, takže sa vyžaduje trpezlivosť.
Ochranné účinky intratracheálne podávanej fosfolipázy A2 z včelieho jedu na alergickú astmu vyvolanú ovalbumínom…
Terapeutické možnosti, ktoré sa v súčasnosti používajú na kontrolu symptómov astmy, zahŕňajú β2 agonisty a kortikosteroidy. Obe tieto liečby sú účinné pri kontrole škodlivých vedľajších účinkov astmy.
Pre túto štúdiu sa starostlivo skúmal jeden z hlavných prvkov BV (včelí jed), charakteristika PLA2 (fosfolipáza A2). Z tohto dôvodu bol vybraný klinický model astmy a uvažovalo sa, ako PLA2 pomáha pri znižovaní zápalu dýchacích ciest a zlepšovaní funkcie pľúc.
Na experiment boli vybrané samice myší BALB/c, ktorým bola vyvolaná alergická astma. Intraperitoneálna injekcia OVA (ovalbumín) bola podaná v 1. a 14. deň klinickej štúdie. Po OVA nasledovala intratracheálna skúška s 1 % OVA podaná 6-krát počas 22. a 30. dňa liečby.
Počas tejto doby sa hodnotila pľúcna histológia a infiltrácia imunitných buniek, ako sú cytokíny Th2 v pľúcach, u samíc myší, ktorým sa podával OVA, a neúčasti na intratracheálnej skúške PLA2 včelieho jedu.
Výsledky ukázali, že intratracheálne štúdie PLA2 z včelieho jedu viedli k potlačeniu alergickej astmy vyvolanej OVA u samíc myší. Zápal dýchacích ciest bol zvládnutý v dôsledku zníženia AHR. Pomáha tiež pri znižovaní hyperplázie pohárikovitých buniek. Okrem tohto účinku sa zistilo, že došlo k výraznému zníženiu produkcie Th2 cytokínov, ako sú IL-13, IL-5 a IL-4. Okrem toho sa znížil aj celkový počet buniek, ktoré zahŕňali neutrofily, makrofágy a eozinofily v dýchacích cestách.
Fosfolipáza A2 z včelieho jedu potláča alergický zápal dýchacích ciest pri astme vyvolanej ovalbumínom…
Terapia včelím jedom sa už dlho používa v rôznych formách a kombináciách na liečbu chronických zápalových ochorení. Včelí jed je považovaný za jeden z najlepších alternatívnych liekov na problémy s dýchacími cestami. Už bolo preukázané, že včelí jed zvyšuje prirodzenú imunitnú toleranciu zvýšením množstva Tregs (T buniek) pri rôznych poruchách imunitného systému.
Napriek tomu je potrebné určiť, ako včelí jed pomáha regulovať túto špecifickú reakciu imunitného systému. V tejto klinickej štúdii sa podrobne skúmalo, ako včelí jed PLA2 podporuje pozitívne účinky, ktoré sa dodávajú prostredníctvom T-buniek v rôznych modeloch astmy. PLA2 z včelieho jedu sa podával myšiam po expozícii OVA intraperitoneálnou injekciou. Počas tejto štúdie sa študoval vývoj a správanie myší po expozícii OVA z hľadiska pľúcnej histológie, Th2 cytokínov, Treg populácie a diferenciálu a celkového počtu buniek v tekutine z bronchoalveolárnej laváže.
Deplécia Treg sa pozorovala na posúdenie redukcie symptómov súvisiacich s astmou a migráciou Treg. Závislosť CD206 na liečbe PLA2 včelím jedom, ktorá vedie k potlačeniu zápalu dýchacích ciest u myší po OVA bola tiež vyhodnotená v pravý čas. Liečba PLA2 včelím jedom pomohla vyvolať Tregs, ktoré nakoniec znížili infiltráciu zápalových buniek v pľúcach myší s infekciou OVA. Pozorovalo sa, že Th2 cytokíny prítomné v BALF (tekutina z bronchoalveolárnej laváže) boli významne znížené u myší liečených PLA2 včelím jedom.
Ale zníženie zápalových buniek po podaní PLA2 včelieho jedu po stimulácii OVA nebolo pozorované u myší zbavených Treg. Okrem toho sa tiež skúmalo, aký typ zapojenia je kontrolovaný CD206 v modeloch astmy u myší, ktoré boli vystavené OVA po liečbe včelím jedom PLA2.
Podľa klinického hodnotenia došlo k pôsobivému zníženiu hladín zápalových buniek a TH2 cytokínov v tekutine z bronchoalveolárnej laváže tých myší s infekciou OVA, ktoré boli liečené včelím jedom PLA2. Ale myši PLA2 CD206 indukované vajcom a včelím jedom nevykazovali túto pozitívnu reakciu. Vo svetle tohto klinického pozorovania možno ľahko povedať, že včelí jed PLA2 môže zmierniť zápal dýchacích ciest indukciou Tregs v astmatických modeloch myší s infekciou OVA.
6 samcov myší C57BL vo veku 6 až 7 týždňov bolo získaných z Charles River Korea, Orient Bio, Kórea. Zatiaľ čo myši CD206 (B6.129P2‐Mrc1tm1Mnz/J, myši Foxp3EGFPC57BL/6 a myši Foxp3EGFPBalb/c (C.Cg‐Foxp3tm2Tch/J) boli získané z laboratória Jackson Laboratory, Bar Harbor. Všetky modely myší boli poskytnuté klimatizácia a správny 12-hodinový cyklus svetla a tmy spolu s podmienkami bez patogénov. Dostali tiež prístup k jedlu a vode, aby sa zabezpečilo, že zostanú zdravé počas klinickej štúdie. Metóda prijatá na vykonávanie laboratórneho výskumu na myšiach bolo podľa špecifikovaných pravidiel starostlivosti o zvieratá a hlavných zásad pre pokusy na zvieratách na zvieratách, ktoré uznala Univerzita Kyung Hee pre starostlivosť o zvieratá a ich používanie.
Modelové myši boli pripravené na štúdiu intraperitoneálnou injekciou s hydroxidom hlinitým 20 mg a ovalbumínom, ktorá bola podaná 1. a 14. deň. Myši boli tiež intratracheálne stimulované iba 1 % OVA podaným 6-krát medzi 20. a 31. dňom. Na druhej strane negatívne kontrolné myši boli stimulované a pripravené so samotným PBS. Skupina vystavená PLA2 včelím jedom bola liečená intraperitoneálnou injekciou PLA2 z včelieho jedu v dávke 0,2 mg/kg každé tri dni medzi 3. a 17. dňom. Nový laboratórny experiment sa uskutočnil po 24 hodinách podávania poslednej intratracheálnej expozície OVA.
Hladiny IFN-γ, IL-13, IL-5 a IL-4 v BALF boli hodnotené pomocou systému BD Biosciences System určeného špeciálne na hodnotenie hladiny týchto faktorov prostredníctvom kvantitatívnej sendvičovej súpravy na imunoanalýzu s enzýmom. Hladina sérových OVA-špecifických IgE a jednoduchých IgE bola meraná pomocou ELISA. Po podaní anestézie myšiam sa odobrali vzorky krvi z ich retroorbitálneho plexu. Na získanie vzoriek séra sa použila centrifugačná metóda. Tie sa až do testu skladovali pri teplote mínus 20 stupňov Celzia. Na meranie hladín IgE sa uskladnené vzorky séra zriedili 5 % FBS v testovacom riedidle.
V 31. deň klinického vyšetrenia boli myši dôkladne analyzované pomocou neinvazívnej metódy funkčného merania pľúc na výpočet AHR. Modelové myši sa umiestnili do barometrickej pletyzmografickej komory na tri minúty, aby sa získali základné hodnoty.
Štatistická analýza všetkých zhromaždených vzoriek údajov sa uskutočnila pomocou softvéru Prism 5 získaného od Graph Pad Software Inc., CA, USA. Akýkoľvek druh rozdielov medzi ošetrenými vzorkami a prostriedkami kontroly sa ďalej skúmal
e way ANOVA z tureckého viacnásobného porovnávacieho testu.
Podľa štúdií uskutočnených skôr sa zistilo, že percento Tregs významne vzrástlo v splenocytoch ošetrených PLA2 včelím jedom v porovnaní s bunkami ošetrenými PBS. Nedávne správy naznačujú, že Tregs môže pomôcť potlačiť hyperreaktivitu a zápal dýchacích ciest u myší s modelom astmy. Na definovanie úlohy PLA2 včelieho jedu pri indukcii Treg buniek do dýchacích ciest sa vypočítalo percento Treg buniek prítomných v pľúcnych tkanivách u myší s astmou vyvolanou OVA.
Očkovanie sa uskutočnilo dvakrát, myšiam s OVA v 1. a 14. deň klinickej štúdie. Hneď po 6 dňoch druhej imunizácie boli myši intratracheálne stimulované prostredníctvom 1% OVA, ktoré bolo podané 6-krát medzi 20. a 31. dňom. Zistilo sa, že populácia Treg sa v skupine OVA v porovnaní so skupinou CON nezmenila. Na druhej strane populácia Treg vykazovala pôsobivý nárast v skupine OVA liečenej včelím jedom.
Populácia Treg u myší s depléciou Treg nevykazovala žiadnu významnú zmenu po liečbe PLA2 včelím jedom. Dôvodom je, že účinky injekcie anti CD25 protilátky už boli u týchto myší prítomné. Potom sa skúmal profil mRNA pľúcnych tkanív z myší liečených PLA2 + OVA, OVA a WT, aby sa vyhodnotila secernovaná produkcia PLA2 u astmatických myší vyvolaných OVA. Zistilo sa, že nebolo zaznamenané žiadne zvýšenie týkajúce sa Spla2-V a Spla2-IID u OVA+PLA2 a OVA-indukovaných myší v porovnaní s WT myšami.
Po stimulácii OVA celkový počet lymfocytov, makrofágov, neutrofilov, eozinofilov a buniek v tekutine BAL vzrástol a to jasne ukazuje, že indukcia alergickej astmy u myší bola úspešná. Tiež sa zistilo, že zápalové bunky po liečbe PLA2 včelím jedom ubudli. Podobný účinok sa však nezaznamenal v skupine s depléciou buniek Treg. Hoci Th2 cytokíny boli znížené po liečbe včelím jedom v OVA-indukovanom modeli astmatických myší.
Histologická analýza pľúcnych tkanív zo skupiny OVA myší preukázala nadmerný nárast zápalových buniek lokalizovaných v pľúcnom parenchýme. Skupina CON nepreukázala žiadny alarmujúci nárast zápalových buniek. PLA2 terapia včelím jedom tiež kontrolovala prejavy zápalových buniek a znižovala populáciu PAS-pozitívnych pohárikovitých buniek umiestnených okolo bronchiálnych dýchacích ciest. Avšak ani vzhľad MYL9, ani počet PAS-pozitívnych pohárikovitých buniek sa nezmenil ošetrením včelím jedom u myší zbavených Treg.
Ak zhrnieme laboratórny výskum vykonaný na rôznych modeloch skupiny astmatických myší, možno vyhlásiť, že podávanie kontrolovaného a formulovaného; Liečba PLA2 včelím jedom môže pomôcť kontrolovať príznaky alergickej astmy. BvPLA2 je účinný zdroj na reguláciu Tregs v bronchiálnych dýchacích cestách. Dá sa tiež povedať, že populácia Treg, ktorá bola indukovaná liečbou PLA2 včelím jedom, je priamo spojená s CD206, ktorý zmierňuje alergický zápal.
Na spresnenie a definovanie zapojenia molekulárneho mechanizmu, ktorý sa podieľa na procese PLA2-CD206 včelieho jedu, je však potrebná ďalšia štúdia. Mohlo by to pomôcť pri vývoji účinnej terapeutickej stratégie na liečbu pacientov s astmou – bez akýchkoľvek závažných vedľajších účinkov.
Zdroje:
Protective Effects of Intratracheally-Administered Bee Venom Phospholipase A2 on Ovalbumin-Induced Allergic Asthma…
Bee Venom Phospholipase A2 Suppresses Allergic Airway Inflammation In An Ovalbumin‐Induced Asthma…